ELISA***盒的成分
1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N*** 12mL x 1
8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但***盒没有提供) (450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性***管(用于浓缩酶标记和显色剂)
ELISA***盒的操作方法——间接法
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1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二(抗)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;
6.然后用DDW洗涤。
其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。
ELISA***盒——会出现的问题及解决办法
阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。
a.原因:微孔中的***未能充分混合。
解决办法: ***加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。
b.原因:洗板过程发生问题。
解决办法:请随时监控洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。
c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。
解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。
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