ELISA***盒的测定原理

测定技术的基础在于抗原之间的特异结合反应，所以任何的诊断剂离不开好的原料，如抗原，酶等。以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原，而则为纯化抗原动物后获得的多和使用杂交瘤技术得到的，而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用***工程方法制备各种特殊的抗原或及其酶结合物等测定***几成为现实的新一代***，各种新型使用的测定方法也不断出现。

Elisa***盒操作步骤

1、固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。

2、包被或抗原的挑选：将或抗原吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。

3、 酶标记作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法'，在正式试验体系里准确地滴定其作业浓度。

4、酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。

Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

不正常的标准曲线

1  错误的方法重悬标准品  加入正确量的溶液重悬标准品，重悬充分

2  标准品稀释错误  按照说明书要求稀释标准品

3  标准品污染  使用一次性的灭菌吸头， 标准品贮存于2-8 ℃

4  错误的倍比稀释步骤  按照说明书倍比稀释标准品

5  波长选择错误 TMB为底物和以OPD为底物的***盒均有使用，而 前者比色波长为450nm，后者为492nm。双波长比色分析优于单波长。

6  标准品混用  不同批号***勿混用

7  ***盒在运输途中时间太长，温度太高，标准品失活  尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温

8  ELISA未终止而直接检测450nm和620nm TMB显色需终止后检测，否则会出现620nm比450nm读数高的现象。（数值仍有梯度规律）