ELISA***盒的制备方法
包括以下步骤:
1)抗原表位的计算机筛选;
2)抗原的制备;
3)采集;
4)间接ELISA方法的建立;
5)间接ELISA方法的敏***和特异性验证;
6)***盒的稳定性验证;
7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的***盒能有效检出戊型病毒,适用于大批量发病样本的检测,可用于猪戊肝的快速诊断,并预防、控制猪戊病毒的流行和阻断戊病毒由猪向人传播。
ELISA***盒的操作方法——间接法
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1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二(抗)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;
6.然后用DDW洗涤。
其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。
ELISA***盒的应用领域
ELISA法是诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的病种等方面的诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于流行病学调查。本法不仅可以用来测定,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物***各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:
1、酶染色各种细胞内成份的***。
2、研究抗酶的合成。
3、显现微量的沉淀反应。
4、定量检测体液中抗原或成份。
Elisa***盒操作步骤
1.用盖片镊Elisa***盒将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将Elisa***盒培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
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