低温生物的影响因素有哪些

菌的质量：保藏的应培养在营养丰富的条件下，使之进入稳定期，稍老一些的菌体对环境抵抗力强。另处，作为冷冻干燥的菌悬液细胞浓度要高不同的菌对冷冻干燥的耐受程度不同，如果保存的菌液细胞浓度不高，就会使以后传种造成困难，保存期也会受到影响。

保护剂：不同种类的保护剂对不同微生物的作用是不同的，如个别在脱脂乳作保护剂的情况下失败率高达99.99%，而采用葡聚糖等混和保护剂时失败率大大减少。一般情况下，那些容易保存的对保护剂的要求不很严格，而不易保存的对保护剂的要求却很苛刻。因此，选择好的保护剂是冷冻干燥保存的关键因素。

干燥速度：实验表明，慢速干燥比快速干燥存活率高，如青霉菌6h干燥存活率为67.3%，而3h为59%。

空气的影响：冷冻干燥后空气对***细胞影响较大，可导致细胞损伤进而失败，故在冻干后应立即在真空下融封，才有利于长期保存。

温度的影响：在干燥和真空状况下温度的影响远没有上述几项因素重要，因此可以在室温下保存，但许多微生物在4℃保存的存活率要比在室温下高1倍。

含水量的影响：水分含量过高对菌存活不利，完全脱水也不利于保存，一般把干燥后的细胞含水量控制在3%以下(1%-3%)

如何对微生物进行活化

1 定期移植法的复苏较简单，直接转接即可；

2 液体石蜡法保存的在复苏时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次；

3  沙土管法保存在复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面；

4  真空冷冻干燥法保存在复苏时先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，将安瓿管顶部烧热， 用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养；

5  -80℃ 冰箱***法保存复苏时，从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止，约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养

6  液氮超低温***法保存复苏与-80℃ 冰箱***法保存复苏相似，从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。

生物有机肥产品生产使用现状

***类生产用除常见的芽孢外， 还出现了高地芽孢菌、 类干酪乳菌、 屎肠球菌、 盐居固氮菌等新， 其中， 高地芽孢菌和盐居固氮菌普遍存在于土壤环境中， 未见致病性报道， 属风险一级； 类干酪乳菌又名为副干酪乳菌， 虽为风险一级 ， 但有从动物受伤部位分离到该菌的报道；屎肠球菌属于乳酸菌类，属风险二级， 建议谨慎使用。伯克霍尔德氏菌是一些具有生物防治、 促进植物生长和生物修复等功能的***， 但同时也是可以引起鼻疽、 类鼻疽病的致病菌， 因此***伯克霍尔德氏菌属于风险三级， 需做致病性试验， 建议慎用或不用。***类生产用菌株主要为丝状***和酵母菌。哈茨木霉、 米曲霉、 淡紫紫孢菌、 长枝木霉、 绿色木霉、 棘孢木霉、 黑曲霉、 粉红螺旋聚孢霉、 金龟子绿僵菌等属于生物安全风险等级二级， 需按照NY/T 1109－2017 《微生物肥料生物安全通用技术准则》 进行毒理学测试。酵母菌主要以酿酒酵母为主， 还有少量东方伊萨酵母、杰丁塞伯林德纳氏酵母 （原产朊假丝酵母、 杰丁毕赤酵母）、 膜醭毕赤酵母、 解脂耶罗威亚酵母等， 属于生物安全风险等级一级， 可免做毒理学试验。

                                                         唤醒盛水的低温生物

目前，保藏中心保存有各类微生物资源5700种、50000余株，用于程序的生物材料有1万余株。那么，数目庞大的微生物资源，从“清醒”到被“沉睡”经历了什么？

“首***行存活度和纯度检测，然后用***测定来核实的正确性，继而用真空冷冻干燥法或液氮超低温***法保存。”保藏时一般两种方法会互为备份，使用液氮法保存6份，真空法则要备份12个。

“通过冷冻技术处理后，***就会处于休眠状态。如果要活化使用，则需通过相应的培养液进行活化，才能***活性。”以格氏嗜盐碱为例说，复活所需的营养为：20%的氯化钠，酪蛋白、氨基酸、pH值为9等，在适宜的温度和培养基中，这些沉睡的***便会被重新唤醒。