如何对微生物进行活化

1 定期移植法的复苏较简单，直接转接即可；

2 液体石蜡法保存的在复苏时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次；

3  沙土管法保存在复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面；

4  真空冷冻干燥法保存在复苏时先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，将安瓿管顶部烧热， 用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养；

5  -80℃ 冰箱***法保存复苏时，从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止，约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养

6  液氮超低温***法保存复苏与-80℃ 冰箱***法保存复苏相似，从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。

生物有机肥产品生产安全性分析

虽然目前生物有机肥产品生产大多采用植物根际促生菌， 但近年来很多研究发现，芽孢菌属和类芽孢菌个别菌株能产生菌素。 即便在安全分级目录中列为一级免做理学试验的， 如枯草芽孢菌、 多类芽孢菌、 地衣芽孢菌等个别菌株也检测到部分溶血素***， 潜在危害不容忽视。 因此， 开展生物有机肥产品生产生物安全风险评价， 从源头上把好安全关是产品质量安全的首要保障。通过调研发现， 用于生物有机肥产品的部分生产分类地位不明确， 甚至混乱， 难以从源头上进行安全风险的初步识别 。 以常见生产枯草芽孢菌为例， 实际上是一个表型相似的群体， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎缩） 芽孢菌、莫哈韦（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索诺拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹罗芽孢菌等 10个缘种。生产企业送检的枯草芽孢菌生物有机肥产品， 经鉴定发现很多产品实际为解淀粉芽孢菌， 且许多菌株具有很强的溶血作用。通过对生产企业调研发现， 部分生产企业选择分离于动物肠道的解淀粉芽孢菌作为产品生产用菌株， 该类生产发酵周期短、 活菌数量高、 生产成本低， 但产品的应用***不佳， 溶血风险大 ， 建议慎用。而植物来源的解淀粉芽孢菌溶血风险小， 产品应用效果好， 推荐使用。

防止低温生物退化的措施

1.合理的育种 选育时所处理的细胞应使用单核的，避免使用多核细胞；

合理选择诱变剂的种类和剂量或增加突变位点，以减少分离回复；在诱变处理后进行充分的后培养及分离纯化，以保证保藏纯碎。这些可有效的防止的退化。

2.选用合适的培养基有人发现用老苜蓿根汁培养基培养“5406”抗生菌—细黄链霉菌可以防止它的退化。在赤霉菌产生菌—藤仓赤霉的培养基中，加入糖蜜、天门冬素、谷氨酰胺、5-核苷酸或甘醇等物质时，也有防止退化的效果。也有选取营养相对贫乏的培养基做保藏培养基，如培养基中适当限制容易利用的糖源葡萄糖等的添加，因为变异多半是通过菌株的生长繁殖而产生的，当培养基营养丰富时，菌株会处于旺盛的生长状态，代谢水平较高，为变异提供了良好的条件，大大提高了菌株的退化几率。

3.创造良好的培养条件 在生产实践中，创造和发现一个适合原种生长的条件可以防止退化，如低温、干燥、缺氧等。在栖土曲霉3．942 的培养中，有人曾用改变培养温度的措施(从20-30℃提高到33-34℃)来防止它产孢子能力的退化。

4.控制传代次数由于微生物存在着自发突变，而突变都是在繁殖过程中发生而表现出来的。所以应尽量避免不必要的移种和传代，把必要的传代降低到很低的水平，以降低自发突发的机率。传代次数越多，产生突变的几率就越高，因而发生退化的机会就越多。这要求不论在实验室还是在生产实践上，必须严格控制的移种传代次数，并根据保藏方法的不同，确立恰当的移种传代的时间间隔。如同时采用斜面保藏和其它的保藏方式（真空冻干保藏、砂土管、液氮保藏等），以延长保藏时间。