低温生物通用工艺包

生物的产品在不同规模的小试和中试系统上进行过工艺开发与连续生产，已开发出在多种应用场景下利用吉态来生物微生物进行生产的通用工艺包。使用过的原料包括：合成氨弛放气、焦炉煤气、生物质气化气、钢瓶气和工业等。产出的产物包括：饲料蛋白原料（鱼粉替代物）、生物油脂（脂肪酸）、生物柴油（脂肪酸甲酯）等大宗原料或产物，以及蛋白酶、DHA等高附加值产物。中试实现连续运行、稳定生产。该通用工艺包采用模块化设计，其中模块A为吉态来生物的产品，B/C/D为对应的发酵模块、原料预处理模块以及产物后处理模块。工程企业可直接使用该工艺包进一步优化，或在此基础上为业主提供工程项目的定制解决方案

                                                                        低温生物宝藏的目的

       微生物在使用和传代过程中常常容易发生污染、变异甚至死掉的情况，因而常常造成的衰变，并有可能使优良丢失。因此保藏的重要意义就在于尽可能的保持其原有性状和活力的稳定性，还有确保不死、不变异、不被污染，保持菌株优良性状不退化，保持优良菌株存活，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。

低温生物***纯化方法

1、倾注平板法

首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物 2、涂布平板法

首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。3、平板划线法

简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，然后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。

2、富集培养法

富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。所创造的条件包括选择合适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，然后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。

防止低温生物退化的措施

1.合理的育种 选育时所处理的细胞应使用单核的，避免使用多核细胞；

合理选择诱变剂的种类和剂量或增加突变位点，以减少分离回复；在诱变处理后进行充分的后培养及分离纯化，以保证保藏纯碎。这些可有效的防止的退化。

2.选用合适的培养基有人发现用老苜蓿根汁培养基培养“5406”抗生菌—细黄链霉菌可以防止它的退化。在赤霉菌产生菌—藤仓赤霉的培养基中，加入糖蜜、天门冬素、谷氨酰胺、5-核苷酸或甘醇等物质时，也有防止退化的效果。也有选取营养相对贫乏的培养基做保藏培养基，如培养基中适当限制容易利用的糖源葡萄糖等的添加，因为变异多半是通过菌株的生长繁殖而产生的，当培养基营养丰富时，菌株会处于旺盛的生长状态，代谢水平较高，为变异提供了良好的条件，大大提高了菌株的退化几率。

3.创造良好的培养条件 在生产实践中，创造和发现一个适合原种生长的条件可以防止退化，如低温、干燥、缺氧等。在栖土曲霉3．942 的培养中，有人曾用改变培养温度的措施(从20-30℃提高到33-34℃)来防止它产孢子能力的退化。

4.控制传代次数由于微生物存在着自发突变，而突变都是在繁殖过程中发生而表现出来的。所以应尽量避免不必要的移种和传代，把必要的传代降低到很低的水平，以降低自发突发的机率。传代次数越多，产生突变的几率就越高，因而发生退化的机会就越多。这要求不论在实验室还是在生产实践上，必须严格控制的移种传代次数，并根据保藏方法的不同，确立恰当的移种传代的时间间隔。如同时采用斜面保藏和其它的保藏方式（真空冻干保藏、砂土管、液氮保藏等），以延长保藏时间。