低温生物的保存方法有哪些？

（一）培养基保存法

利用各种斜面和半固体培养基，加上石蜡油保存，是一种简易的保存方法。

1.普通琼脂斜面保存法：肠道菌、等一般***可接种于不含糖的普通琼脂斜面上，斜面底部应加少许无糖肉膏汤，以防干涸。经35℃培养18～24h后，移种于4℃冰箱中，一般可保存一个月，每月传代一次。

2.血液琼脂斜面保存法：链球菌、应接种于血液琼脂斜面上，35℃培***长后，置4℃冰箱中保存，链球菌须半个月至1个月移种一次，新分离菌株须2～4天移种一次，以后逐渐延长移种时间，在适应后可延至半个月移种一次。

3.巧克力色斜面保存法：宜保存菌，并在35℃孵箱中保存，一般每2天移种一次。

4.鸡蛋斜面保存法：适于保存含有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的***，一般可保存一个月。

5.半固体穿刺保存法：将***接种于琼脂半固体或琼脂半固体内，经35℃培养18～24h，再以无菌方法加入灭菌的液体石蜡。高度约lcm，置4℃冰箱保存。保存时间可达3～6个月。

（二）干燥保存法

原理是将***体内的水分蒸发掉，使其处于休眠和代谢停滞状态，从而达到长期保存的目的医|学教|育网搜集整理。干燥后低温保存，可保存数年至十几年。

（三）冷冻干燥保存法

本法又称冷冻真空干燥法。它综合利用了各种有利于保存的因素（低温、干燥和缺氧等），是目前有效的保存方法之一。用本法保存的具有成活率高，变异性小等优点，保存期一般3～5年，有的可长达10年以上。

（四）脱脂牛奶保存法

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                                                       低温生物***为什么能适应低温环境？

微生物对温度的要求不同与它们的膜结构物理化学性质有密切关系 根据细胞膜的液体镶嵌模型，细胞在正常生理条件下，膜中的脂质成分应保持液晶状态，只有当细胞膜处于液晶状态，才能维持细胞的正常生理功能，使细胞处于生长状态微生物的生长温度与细胞膜的液晶温度范围相一致。 
      1、蛋白质结构 

通过对嗜冷酶的蛋白质模型和x一射线衍射分析表明，嗜冷酶分子间的作用力减弱，与溶剂的作用加强，酶结构的柔韧性增加，使酶在低温下容易被底物诱导产生催化作用。

2、蛋白质合成 
嗜冷菌具有在0℃合成蛋白质的能力。这是由于其核糖体、酶类以及细胞中的可溶性因子等对低温的适应，蛋白质翻译的错误率相对低。许多中温菌不能在O0C合成蛋白质，一方面是由于其核糖体对低温的不适应，翻译过程中不能形成有效的起始复合物，另一方面是由于低温下细胞膜的***导致氨基酸等内容物的***。
       3、合成冷蛋白 

低温微生物适应低温的另一机制是合成冷休蛋白 将大肠菌从370C突然转移到100C条件时细胞中会诱导合成一组冷休蛋白，它们对低温的生理适应过程中发挥着重要作用，检测嗜冷酵母的冷休反应，发现冷刺激后冷休蛋白在很短时间内大量产生。 耐冷菌由于生活在温度波动的环境中，它们必须忍受温度的快速降低，这与它们产生的冷休蛋白是密切相关的。

                                                 低温生物的分离方法有哪些？

先将所需的种******采集回来，选取新鲜、个体大、壮实、中龄及无病虫害的子实体（或菌核、菌索），作为分离用的材料。若为子实体，取其菌盖或菌柄***；若为菌核，取其全部或部分（如茯苓）菌核；若为菌索，取其部分根状菌索（如蜜环菌）。再用0.1 %或75 %酒精进行表面消毒2 分钟，用无菌水（或冷开水）冲洗数次，洗净残留的药液后切成小块。，然后，放入PDA 培养基的试管或培养皿上，置24 ～26℃温度下，培养5 ～ 7 天。在分离的******周围见长有白色菌丝时，应及时将菌丝移至斜面试管培养基上，再置温度24 ～26 ℃下培养7～10 天，即得纯。所得的纯还可继续扩大培养或保藏。

申请时，有新的低温生物的必须要办理保藏吗？

如果得到了审批权人却没有构成的新要件，显而易见是需要保藏的。发酵饲料原料与配方:配制好的发酵饲料1000公斤，水350-400公斤(夏天350，冬天400)，饲料发酵剂5公斤,100-200克纳豆菌。 制作稀释活化发酵液:将5公斤饲料发酵剂和100-200克纳豆菌倒入350-400公斤水中搅拌均匀制成活化发酵液。 将制成的活化发酵液与1000公斤发酵饲料混合均匀，湿度以手捏成团不滴水，一触即散为宜。有搅拌机的大型养殖场将活化发酵液慢慢加入饲料中搅拌均匀即可;没有搅拌机的养殖户将活化发酵液慢慢少量喷到饲料上，用铁锹搅拌均匀，注意:不能有团块、水结块，用手将团块、水结块搓散搅拌均匀。 大型养殖场可以将配置好的饲料在地面压实堆成垛或者装入水泥池压实，用塑料薄膜密封或者使用厚实的不透气的塑料碎团块、水结块。