达州着色剂亮蓝供应商欢迎来电「多图」
作者:富舜新材料2022/7/18 6:18:55






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考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程:

该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精que的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。

1.Bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇,加入100ml85%的磷酸,然后,用蒸馏水补充至1000ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定。

2.标准曲线蛋白质样本的准备:尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗ti,可用纯化的抗ti作为标准。如果待测样本是未知的,也可用抗ti作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。

3.将待测样本溶于缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(hao用PBS)。

4.按1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去。

5.每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min.

6.根据标准曲线计算待测样本的浓度。


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?本考马斯亮蓝染色***盒(Commassie?Blue?Staining?Kit)采用了经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。这步染色完全可以省略,一般都可以用预染Marker来进行转膜观察,另外考马斯亮蓝与蛋白结合后,很难再去除。?

 ???使用本***盒,采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋***带;采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋***带。观察到清晰的蛋***带则需染色脱色更长时间。?

 ???本***盒中的染色液和脱色液经过改良,不含***的jia醇,但含有刺激性气味的yi酸。


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亮蓝鉴别试验

(1)本品的水溶液(1+2000),显蓝色。

(2)取本品的水溶液(1+1000)5ml,加盐酸1ml时,变为暗黄绿色。

(3)本品的***溶液(1+100)显暗橙色,取此液2-3滴加水5ml时,显绿色。

(4)本品的水溶液(1+1000)5ml,加氢氧化na溶液(1+5)5ml,在水浴中加热时变为紫红色。

(5)取本品0.1g,加yi酸铵溶液(3+2000)200ml 溶解,取此溶液1ml,加yi酸铵溶液(3+2000)配至100ml的溶液,在波长628-632nm处有da吸收带。本段纯度试验(1)水不容物 小于0.20%。

(2)氯化物、***盐 以总量计,小于4.0%。

(3)*** 以Pb计,小于20ug/g。

(4shen以As2O3计,小于4.0ug/g。


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