山东富舜新材料科技有限公司座落在美丽的“泉城”济南。公司是集化学科研、开发、生产、销售、服务为一体的综合型企业。?电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。我公司拥有***的生产设备,完善的产品检测手段和质量保证体系。我公司的员工具有较强的责任感。经过多年的发展,现已形成添加剂、阻燃剂、和化工助剂三大类上百个品种。公司本着“诚信经营、专注品质”的宗旨,参与到激烈的市场竞争中来,以好的产品质量,优惠的产品价格,令人满意的销售服务,赢得大家的支持与信赖。山东富舜新材料科技有限公司的诚信、实力和产品质量获得业界的认可。欢迎各界朋友莅临参观、指导和业务洽谈。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程:
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精que的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1.Bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇,加入100ml85%的磷酸,然后,用蒸馏水补充至1000ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2.标准曲线蛋白质样本的准备:尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗ti,可用纯化的抗ti作为标准。如果待测样本是未知的,也可用抗ti作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3.将待测样本溶于缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(hao用PBS)。
4.按1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去。
5.每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min.
6.根据标准曲线计算待测样本的浓度。
山东富舜新材料科技有限公司座落在美丽的“泉城”济南。公司是集化学科研、开发、生产、销售、服务为一体的综合型企业。注意,显色反应不得超过30min.6.根据标准曲线计算待测样本的浓度。我公司拥有***的生产设备,完善的产品检测手段和质量保证体系。我公司的员工具有较强的责任感。经过多年的发展,现已形成添加剂、阻燃剂、和化工助剂三大类上百个品种。公司本着“诚信经营、专注品质”的宗旨,参与到激烈的市场竞争中来,以好的产品质量,优惠的产品价格,令人满意的销售服务,赢得大家的支持与信赖。山东富舜新材料科技有限公司的诚信、实力和产品质量获得业界的认可。欢迎各界朋友莅临参观、指导和业务洽谈。
考马斯亮蓝染色?使用说明:
? 1.?常规染色脱色方法:
? a.?电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
?b.?置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1小时或更长时间。亮蓝中文别名[[[4-[N乙机-N-(3′-磺基苯甲ji)-氨基、苯ji、-(2′-磺基苯ji)-亚甲ji]-2,5-亚环己二烯基]-(3′-磺基苯甲ji)-乙机胺二钠盐、C。? 注:具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。染色2-4个小时或更长时间不会对终的染色效果产生fu面影响。?
c.?倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。
? d.?加入适量考马斯亮蓝染色脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
? e.?置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色4-24小时。(4)取本品水溶液,做纸上层析,其主色点的Rf值应与标准品相同。期间更换脱色液2-4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋***带染色效果达到预期。通常蛋***带在脱色1-2小时后即可出现。? 注:脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使部分染料吸附在吸水纸上,加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋***带的颜色变浅。
? f.?完成脱色后,可以把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保? 存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。?
2.?快速染色脱色方法:?
a.?电泳结束后,取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。通常对于胶浓度大于10%的胶比较坚韧,在发生煮沸时不易破损;对于胶浓度小于10%的胶,宜尽量避免煮沸,以免出现胶碎裂的情况。
?b.?随后在染色液温度较高的情况下,在室温摇床上摇动5-10分钟。
? d.?加入适量考马斯亮蓝染色脱色液,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
? e.?微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
? f.?随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动5-10分钟。此时通常可以观察到比较清楚的蛋***带。
? g.?更换新鲜的脱色液,重复步骤e和步骤f,直至蓝色背景基本上全部被脱去,蛋***带染色效果达到预期。?
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