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考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么
在酸性条件下,考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合,导致da吸收峰由465 nm 变为595 nm,同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford***混合,测量在595 nm处的吸收值,在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下,蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。?随后在染色液温度较高的情况下,在室温摇床上摇动5-10分钟。
考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色,da光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有da光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;为了使青团刚做出来时鲜亮的“翡翠色”一直得以保持,就会在里面添加少量的亮蓝。其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法是1976年Bradford建立,***配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,xaio可测2.5μg/mL蛋白质,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。经过多年的发展,现已形成添加剂、阻燃剂、和化工助剂三大类上百个品种。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
山东富舜新材料科技有限公司座落在美丽的“泉城”济南。近日,有关本市老zi号功德林生产的青团中“违fa添加了化工色素亮蓝”的消息,引起广大市民关注。公司是集化学科研、开发、生产、销售、服务为一体的综合型企业。我公司拥有***的生产设备,完善的产品检测手段和质量保证体系。我公司的员工具有较强的责任感。经过多年的发展,现已形成添加剂、阻燃剂、和化工助剂三大类上百个品种。公司本着“诚信经营、专注品质”的宗旨,参与到激烈的市场竞争中来,以好的产品质量,优惠的产品价格,令人满意的销售服务,赢得大家的支持与信赖。山东富舜新材料科技有限公司的诚信、实力和产品质量获得业界的认可。欢迎各界朋友莅临参观、指导和业务洽谈。
考马斯亮蓝染色?使用说明:
? 1.?常规染色脱色方法:
? a.?电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
?b.?置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1小时或更长时间。(1975)42090性状红紫色均匀粉末或颗粒,有金属光泽,无臭。? 注:具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。染色2-4个小时或更长时间不会对终的染色效果产生fu面影响。?
c.?倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。
? d.?加入适量考马斯亮蓝染色脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
? e.?置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色4-24小时。截至目前,质监部门的抽检显示,本市尚未发现青团中亮蓝添加过量的情况。期间更换脱色液2-4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋***带染色效果达到预期。通常蛋***带在脱色1-2小时后即可出现。? 注:脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使部分染料吸附在吸水纸上,加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋***带的颜色变浅。
? f.?完成脱色后,可以把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保? 存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。?
2.?快速染色脱色方法:?
a.?电泳结束后,取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。通常对于胶浓度大于10%的胶比较坚韧,在发生煮沸时不易破损;对于胶浓度小于10%的胶,宜尽量避免煮沸,以免出现胶碎裂的情况。
?b.?随后在染色液温度较高的情况下,在室温摇床上摇动5-10分钟。
? d.?加入适量考马斯亮蓝染色脱色液,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
? e.?微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
? f.?随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动5-10分钟。此时通常可以观察到比较清楚的蛋***带。
? g.?更换新鲜的脱色液,重复步骤e和步骤f,直至蓝色背景基本上全部被脱去,蛋***带染色效果达到预期。?
名称
一般品名:食用青色1号
英文名:Brilliant Blue FCF
性状
本品为有金属光泽,带红色的紫色粉末或颗粒,无臭味。易溶于水,呈绿色蓝色溶液 ,溶于乙醇、甘油、丙二醇。耐光、耐热性强。对柠檬酸、酒石酸、碱均稳定。
制法
由邻磺酸与N-,N-(3-磺基芐基)-缩合后氧化制得)。
质量标准
项目
指标
GB 7655.1
FAO/WHO
FCC
日本食品添加物公定书
亮蓝60
亮蓝85
含量/%≥
60.0 85.0
85
85.0
干燥失重/%≤
10.0
15
氯化物、***盐/%≤
1.0
4.0
水不溶物/%≤
0.3 0.2
0.2
0.20
萃取物/%≤
0.3
-
0.4
副染料/%≤
6.0
合格
/%≤
0.0001
0.0003
***/%≤
0.001
0.004
0.0004
铬/%≤
0.005
0.002
锰/%≤
铅/%≤
0.0010
隐色体/%≤
5.0
未结合中间体及副反应物邻、间、对磺基/%≤
1.5
芐基磺酸/%≤
0.3 0.3
铜、铬、锌、锑、钡***盐/%≤
总芳伯胺/%≤
0.01
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