PCR实验室建立方法
1、建立样品准备区
这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的***时应该采取预防措施:⑴PCR产物和带有要扩增序列的DNA克1隆不能在这个房间操作。⑵***培养物、***标本和血1清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。发展方向:致***致畸试验、慢性毒性试验、营养指标毒理试验分区:A、动物房B、实验区需要添置的仪器:冷冻切片机、显微镜、电子天平等。⑶用于样品处理的工具不能被用作普通分子克1隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。⑸大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。⑺任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、建立前PCR区。
该去专门用于准备各种反应,这个区域必须保持干净,而且没有来自克1隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有***和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
(4)门要求:实验室的门有各种要求。
内开:门向房间内开。
外开:主要设置在有爆1炸***的房间内。
个别要求:双向弹簧,有的要求单向弹簧或推拉门。
隔声:有的实验室要求安静,要求设置隔声门。
保温:如冷藏室要求采用保温门。
屏蔽:防止电磁场的干扰而设置屏蔽门。
自动门:大门口要求自动门。
(5)窗要求:实验室的窗有各种要求。
开启:指向外开启的窗扇。
固定:有洁净要求的实验室采用固定窗,避免灰尘进入室内。
部分开启:在一般情况下窗扇是关闭的,用空气调节系统进行换气,当检修、停电时,则可以开启部分窗扇进行自然通风。
双层窗:在寒冷地区或空调要求的房间采用。
遮阳:根据实验室的要求而定,有时需要水平遮阳,有时须用垂直遮阳。
有的可用百叶窗。
密闭:窗扇可以开启,但又要防止灰尘从窗缝进入,故采用密闭窗。
屏蔽窗。
隔声窗。
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