原位杂交涉及的步骤：玻片的准备和样品固定，细胞或***的预渗透处理，靶DNA变性（DNA原位杂交），探针制备，原位杂交过程，杂交后洗涤，探针（显色）检测。

　　玻片的准备和样品固定

　　对于染色体涂片，1：1的乙醇/醚处理的载玻片已能符合要求。对于***切片的原位杂交，为了在实验过程中不丢失***样品，可使用多聚赖氨酸或铬矾明胶包被的载玻片。

　　样品的固定步骤是为了保持样品的原有形态学。样品固定是原位杂交中的步骤，从化学反应角度来看，固定剂的使用和选择对后续杂交的影响不会太大，因为核酸杂交的功能分子基团被安全地包裹在DNA双螺旋结构中，而交联剂的使用对RNA基本没有影响。对于染色体涂片，常使用/固定；石蜡包埋的***切片用固定。冷冻切片可通过在4%的甲醛溶液中固定30min，或使用Bouin固定剂。

样品预处理

　　在待测样品中，DNA或RNA通常都是被蛋白包裹缠绕，根据不同的细胞和***样品的应用，可选择合适的预处理方法将靶核酸暴露：

　　内源性酶灭活：如果探针的检测是通过酶促法进行的，则样品内相应的内源性酶必须被灭活。如内源性的POD可通过含1%H2O2的甲醛溶液处理30min。如果检测酶为AP，可在底物溶液中加入左旋咪唑，AP检测的内源性背景一般来说比POD检测的低得多，因为在杂交过程中，样品中内源性AP酶的活性基本都丧失了。

　　RNase处理：在DNA-DNA杂交实验中，RNase的处理可去除内源性RNA，增加实验的信噪比。在进行mRNA为靶标的检测时，RNase处理的样品也可作为质控对照。通常的处理方式是将DNase-free的RNase溶解于2×***(100μg/ml)，样品在溶液中37℃处理60min。

  简单的说就是用各种动物当做实验的模型对象，来模拟人做科学研究的。比如说我们上学的时候都用过青蛙做实验，也有用鱼或者蚯蚓还有猫的，这些就是简单的一种造模了，通常来说在实验室里面用到的比较多的实验动物就是小白鼠了，这个我们大家都是有了解的。

用途有哪些 ：

      运用这种模技术的实验内容也是非常多的，具体的可以根据你要研究的不同科研项目来定，比如说你想实验一种因素如果作用在人类的身上会有什么影响或者造成什么效果的话，就可以先把这个因素作用在你要实验的动物身上，先观察一下具体反应，做好相关的实验记录，后在实验周期结束以后再观察一下实验动物的具体结果就可以了。比如说我们都知道小脑是支配我们***平衡能力的一个**系统，如果想实验这个理论的话，就可以用大头针对实验动物进行硬脑模穿刺，这样就可以摧毁动物的一侧小脑，等小脑被摧毁以后，你就可以看到实验的动物对象已经不能够维持基本的平衡了，会在桌子上不停的滚动，这个过程就是一个基本简单的实验动物造模。

肝纤维化动物模型特点：

①肝纤维化出现早，出现率高；

②动物整体损伤轻微，毛发、生长情况正常；

③纤维化***中大量胶原，Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA增多。

慢性活动性患者循环复合物多为阳性，猪模型可用于慢性所致肝纤维化的研究，对于研究复合物的形成，沉积和清除及对于防治损伤性肝纤维化有效的筛选，具有意义。

（IDA）发生的主要原因是由于铁的摄入不足和/或铁丢失过多，引起机体血红蛋白合成障碍导

致。IDA模型有大鼠、小鼠、兔、鸡、猫、狗、猴等，其中以大鼠为常用。

动物模型方法：

1. 给予低铁饮食。饲料含铁量≥50mg/kg能满足大鼠的基本需要，低铁饲料的铁含量≤10mg/kg，标准饲

料铁含量为220-270mg/kg。饲料配方以酪蛋白或脱脂奶粉作为蛋白来源，玉米淀粉或蔗糖作为碳水化合物来源，加入植物油，混合***和混合无机盐配制。

近来通过络合剂1%EDTA-2Na除去国产饲料中的铁，取得满意的实验结果。

2. 给动物逐次少量放血，造成铁的慢性丢失。通常采用剪尾的方法，一方面放血不但引起铁的丢失，而且还可以引起其它营养素的丢失；另一方面剪尾易

引起动物而。

3. 低铁饮食辅以定期少量放血。