切片及细胞标本的制备
载玻片的处理 因为原位杂交一般在载玻片上进行,所以载玻片必须保持清洁且不能有任何核酸酶的污染。一般载玻片可先经洗衣粉浸泡过夜,用流水冲洗、酸中浸泡4~8h,再用流水冲洗,双蒸水洗2~3次。在160℃烤箱中烘烤2~4h。基本原理是荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火温度下复性。亦可经15磅高压灭菌20min处理,可将载玻片上的核酸酶消除。
(简称原位杂交,in situ hybridization histochemistry;将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定DNA。ISHH)属于分子杂交的一种,是一种应用标记探针与***细胞中的待测核酸杂交,再应用标记物相关的检测系统,在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术。原位杂交的本质就是在一定的温度和离子浓度下,使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与***细胞内待测的核酸复性结合而使得***细胞中的特异性核酸得到***,并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。
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