实验小鼠血浆取材要求
血液必须在采血时或采血后立即与剂充分混合。采血时与抗凝剂混合方法:用于血液收集的无菌1mL可以将1mL剂从小瓶吸入,然后将全部剂重新注回小瓶,即在采血前用剂“灌注”采血的。采血后与抗凝剂混合方法:向1.5mL离心管中加入不超过150μL的抗凝剂。在相对离心力14000g下离心血样10-15分。用移液管吸取分离的血浆,并转移到干净的离心管中。可将血浆样本在14000g下再离心2-3分钟,以分离任何剩余的红细胞。将分离好的血浆转移到干净的离心管中。
与血浆储存要求
大多数生化分析好的时间是收集后2小时内在室温下进行分析。如果或血浆样品不能在收集后2小时内进行处理,可将样品(放在加盖的试管中)放入4℃冰箱中短期储存(1周)或放入20℃或更冷的冰箱中长期储存(1周至6个月)。但有些指标检测例外,例如氨、乳酸盐和血气分析需要在采集后并在冰浴或4°C立即被分析。胆红素在暴露于直射光时会降解,因此血液用于胆红素分析应该避光(可用铝箔包裹离心管)。检测乳酸脱氢酶建议室温储存。
样品预处理
在待测样品中,DNA或RNA通常都是被蛋白包裹缠绕,根据不同的细胞和***样品的应用,可选择合适的预处理方法将靶核酸暴露:
内源性酶灭活:如果探针的检测是通过酶促法进行的,则样品内相应的内源性酶必须被灭活。如内源性的POD可通过含1%H2O2的甲醛溶液处理30min。如果检测酶为AP,可在底物溶液中加入左旋咪唑,AP检测的内源性背景一般来说比POD检测的低得多,因为在杂交过程中,样品中内源性AP酶的活性基本都丧失了。
RNase处理:在DNA-DNA杂交实验中,RNase的处理可去除内源性RNA,增加实验的信噪比。在进行mRNA为靶标的检测时,RNase处理的样品也可作为质控对照。通常的处理方式是将DNase-free的RNase溶解于2×***(100μg/ml),样品在溶液中37℃处理60min。
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