样品预处理

　　在待测样品中，DNA或RNA通常都是被蛋白包裹缠绕，根据不同的细胞和***样品的应用，可选择合适的预处理方法将靶核酸暴露：

　　内源性酶灭活：如果探针的检测是通过酶促法进行的，则样品内相应的内源性酶必须被灭活。如内源性的POD可通过含1%H2O2的甲醛溶液处理30min。如果检测酶为AP，可在底物溶液中加入左旋咪唑，AP检测的内源性背景一般来说比POD检测的低得多，因为在杂交过程中，样品中内源性AP酶的活性基本都丧失了。

　　RNase处理：在DNA-DNA杂交实验中，RNase的处理可去除内源性RNA，增加实验的信噪比。在进行mRNA为靶标的检测时，RNase处理的样品也可作为质控对照。通常的处理方式是将DNase-free的RNase溶解于2×***(100μg/ml)，样品在溶液中37℃处理60min。

肝纤维化动物模型特点：

①肝纤维化出现早，出现率高；

②动物整体损伤轻微，毛发、生长情况正常；

③纤维化***中大量胶原，Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA增多。

慢性活动性患者循环复合物多为阳性，猪模型可用于慢性所致肝纤维化的研究，对于研究复合物的形成，沉积和清除及对于防治损伤性肝纤维化有效的筛选，具有意义。

（IDA）发生的主要原因是由于铁的摄入不足和/或铁丢失过多，引起机体血红蛋白合成障碍导

致。IDA模型有大鼠、小鼠、兔、鸡、猫、狗、猴等，其中以大鼠为常用。

动物模型方法：

1. 给予低铁饮食。饲料含铁量≥50mg/kg能满足大鼠的基本需要，低铁饲料的铁含量≤10mg/kg，标准饲

料铁含量为220-270mg/kg。饲料配方以酪蛋白或脱脂奶粉作为蛋白来源，玉米淀粉或蔗糖作为碳水化合物来源，加入植物油，混合***和混合无机盐配制。

近来通过络合剂1%EDTA-2Na除去国产饲料中的铁，取得满意的实验结果。

2. 给动物逐次少量放血，造成铁的慢性丢失。通常采用剪尾的方法，一方面放血不但引起铁的丢失，而且还可以引起其它营养素的丢失；另一方面剪尾易

引起动物而。

3. 低铁饮食辅以定期少量放血。

动物模型评价：

1. IDA大鼠早期(Hb≤100g/L)表现为毛发生长差、脱毛、眼球肿胀突出、苍白、兴奋为主，晚期(Hb≤60g/L)表现为倦怠、活动减少，易为主；

2. 血液学及生化检查表现为血红蛋白及铁(功能池)、浓度(交换池)、运铁蛋白及铁含量(贮存池)均显著低于正常对照组。其中以血红蛋

白和铁的变化较敏感。

3. 低铁饲料喂养大鼠5、6周即可出上述表现，F344、Wistar大鼠的反应性优于SD大鼠。

4. 此模型形成期短、稳定、可行，是研究IDA的一个可靠动物模型。