动物实验检测的取材要求介绍:
实验小鼠取材要求
采血后,立即将血液放入1.5mL离心管(不需加抗凝剂或防腐剂)。让血液在室温下静置30-60分钟。在相对离心力(relativecentrifugalforce,RCF)14000g下离心血样10-15分钟,用移液管吸取分离,并转移到干净的离心管中。可将样本在14000g下再离心2-3分钟,以分离任何剩余的红细胞。将分离好的转移到干净的离心管中。
样品预处理
在待测样品中,DNA或RNA通常都是被蛋白包裹缠绕,根据不同的细胞和***样品的应用,可选择合适的预处理方法将靶核酸暴露:
内源性酶灭活:如果探针的检测是通过酶促法进行的,则样品内相应的内源性酶必须被灭活。如内源性的POD可通过含1%H2O2的甲醛溶液处理30min。如果检测酶为AP,可在底物溶液中加入左旋咪唑,AP检测的内源性背景一般来说比POD检测的低得多,因为在杂交过程中,样品中内源性AP酶的活性基本都丧失了。
RNase处理:在DNA-DNA杂交实验中,RNase的处理可去除内源性RNA,增加实验的信噪比。在进行mRNA为靶标的检测时,RNase处理的样品也可作为质控对照。通常的处理方式是将DNase-free的RNase溶解于2×***(100μg/ml),样品在溶液中37℃处理60min。
技术应用:
利用动物模型,科研工作者可以从细胞和分子水平研究的发生和发展过程,对于了解的发病机制和转移机制有重要作用,因此,模型可以作为实验假说和临床假说的实验基础,能为的病因学、发展过程和提供特有的条件。
实验流程:
模型按照建立的方法及研究目的的不同可分为***修饰小鼠模型、自发和诱发小鼠模型和移植小鼠模型,本公司可以根据需求提供适于客户研究所必需的模型。
肝纤维化动物模型化学性损伤法:
雄性Wistar大鼠,体重130g左右,用腹腔内***,次20mg/100g体重,从第二次起12mg/100g体重,每周***2次,共8周。
评价:第3周,在肝小叶间中间带出现大片的肝细胞变性坏死和炎细胞浸润,炎细胞浸润、坏死细胞数和程度超过猪模型。6周后出现纤维束,纤维晚于和少于猪模型。大鼠肝纤维***中有I型胶原的mRNA增多。
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