原位杂交公司服务为先「在线咨询」
作者:思特进2022/7/19 14:05:35






原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或***切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精3确定量***的过程。原位杂交可以在细胞标本或***标本上进行。

原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)是分子生物学、***化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术,始于20世纪60年代。

原位PCR;原位杂交细胞***和PCR的高灵敏度相结合的技术,在细胞(爬片、甩片或涂片)或***(石蜡、冰冻切片)上直接对靶***片段进行扩增,通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。





原位杂交中探针的选择

DNA探针、RNA探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短,因此避免了探针内部退火的问题,在杂交时的渗透能力也更好,探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。DNA探针、RNA探针在合成时需要控制探针片段长度,通常300-1000bp左右,能覆盖到较长片段的靶核酸序列,增加检测的灵敏度。









多彩色荧光原位杂交技术:显而易见,是荧光原位杂交的升级版,采用多个荧光来检测,目前的发展及运用也是较多的。

原位PCR:将原位杂交结合PCR技术发展起来的实验方法。

***组原位杂交技术:该技术在我们的领域可能运用的毕竟少,主要是根据物种DNA同源性差异实现,在农作物等的杂交育种上运用较广,





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惰性多聚体可用来促进250个碱基以上的探针的杂交率。对单链探针可增加3倍,而对双链探针、随机剪切或随机引物标记的探针可增加高达100倍。而短探针不需用促进剂,因其复杂度低和分子量小 ,短探针本身的杂交率就高 。***葡聚糖是一种广泛用于较长双链探针杂交的促进剂。这是一种多聚胺,平均分子量为500 000。另一种常见的促进剂是聚乙二醇(PEG),PEG分子量小(6000~8000)、粘度低、价格低廉,但它不能完成取代***葡聚糖。在某些条件下5%~10%***葡聚糖效果较好,若用5%~10%PEG则可产生很高的本底。因此,使用促进剂时有必要优化条件。



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