武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。***组原位杂交(Genomeinsituhybridization，GISH)技术是20世纪80年代末发展起来的一种原位杂交技术。

***原位杂交（Tissue in situ hybridization）简称原位杂交，指***或细胞的原位杂交，它与菌落原位杂交不同，菌落原位杂交需裂解***释出DNA，然后进行杂交，而原位杂交是经适当处理后，使细胞通透性增加，让探针进入细胞内与DNA或RNA杂交，因此原位杂交可以确定探针互补序列在胞内的空间位置，这一点具有重要的生物学和病理学意义。④多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列。

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荧光原位杂交是近年来发展起来的检测染色体异常的新型技术,在产前诊断中也得到了广泛的应用,成为传统细胞遗传学检测的一种重要补充。用于原位杂交的探针可以是单链或双链DNA，也可以是RNA探针。本文着重介绍了FISH技术的原理及探针的分类,FISH技术在染色体病产前诊断中的应用及前景。

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FISH选用的标本既可以是分裂细胞也可以是间期细胞。荧光原位杂交技术是一种重要的非性原位杂交技术，原理是利用报告分子（如生物素、等）标记核酸探针，然后将探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA杂交，若两者同源互补，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。近年来，随着FISH所应用的探针种类的不断增多，如DAPI /GFP/FITC/PI/Texas-Red等，使得普通的宽场荧光显微镜即可获得高质量的FISH信号。若采用多种方法标记DNA探针，故一次杂交可以同时观察多个探针的信号，使用数字成像系统（CCD/CMOS），分别多次摄取的信号储存在计算机内，通过软件系统的处理，终形成一个复合的多颜色的图像。

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显色以下各步均在室温下进行。杂交与显色杂交将已标记的探针加入预杂交液即成为杂交液（探针浓度为1μg/m1），切片经2×***短暂浸洗后，滴加杂交液，于湿盒内置37℃或42℃孵育过夜。

（1）缓冲液I洗1min。

（2）用含2%正常羊和0.3％TritonX-100的缓冲液I孵育切片30min。

（3）用含1％正常羊和0.3％TronX-100的缓冲液I稀释羊抗Dig。

（4）将稀释液滴加在切片上，封口膜覆盖，湿盒内4℃孵育过夜。

（5）缓冲液I洗10min。

（6）缓冲液Ⅱ洗10min。

（7）加显色液，封口膜覆盖，避光室温孵育2～20h，随时镜检，当显色满意时入缓冲液Ⅲ终止显色。

显色液临用前配，其配方为：①NBT 45μl；②X-Phospllate液 35μl；③左旋咪唑      2.4mg；④缓冲液Ⅱ 加至10ml。

（8）常规脱水、透明、封固。

结果：杂交阳性信号为紫蓝色颗粒。