神经元原代培养是将胚胎哺乳动物神经系统的部分组织,如大脑皮层、海马、脊髓等脑组织直接取出,再接种培养的方法。目前国内、外有关神经元培养的方法较多,但在原代培养中神经元的纯度和产量方面还存在一些急待解决的问题。由于神经元是一种高度分化的细胞,相对于其它细胞而言,神经元在体外更难以存活和生长。因此,体外培养神经元要求的培养方法和营养条件均较为特殊。
神经细胞的体外培养技术是研究神经源性疾病的发病机制、进程的一个重要工具,能很好的、直观的反映离体神经元的发育状况和生理活性,如何建立一个稳定成熟的神经细胞培养体系是神经系统疾病体外实验研究顺利进行的基础。随着基础医学及临床医学研究的逐渐深入,神经细胞的体外培养技术在脑损伤、神经疾病、衰老相关神经疾病方面得到广泛重视和普及应用。
原位杂交过程
杂交前可进行预杂交,以防止较高的背景染色。预杂交条件与杂交条件相同,只是预杂交液中不含探针和硫酸葡聚糖。
靶DNA的变性(对mRNA的原位杂交无需此步)
样品DNA的变性在DNA-DNA杂交检测中是必须的步骤,但同时可能会造成样品形态学的部分破坏,此步是实验中需要优化的一个步骤。常用的变性方法为碱变性和热变性,实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得佳条件。
如使用热变性方法,可在杂交时将探针的变性和样品DNA变性同步进行:将样品和探针溶液加盖盖玻片,置于烘箱80℃变性,染色体DNA样品处理2min,后冷却至37℃进行杂交。组织样品DNA的变性时间可增加至80℃10min。
肝纤维化动物模型化学性损伤法:
雄性Wistar大鼠,体重130g左右,用腹腔内注射,次20mg/100g体重,从第二次起12mg/100g体重,每周注射2次,共8周。
评价:第3周,在肝小叶间中间带出现大片的肝细胞变性坏死和炎细胞浸润,炎细胞浸润、坏死细胞数和程度超过猪模型。6周后出现纤维束,纤维晚于和少于猪模型。大鼠肝纤维组织中有I型胶原的mRNA增多。
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