动物实验检测技术在动物疫病防控中的作用

　　在国内动物疫病检测中，检测人员需要预先在实验室内将动物的产品及动物有关物品开展检查、检测，并根据实际的检测结果，开展动物疫病的防控，并建立科学完善的防控体系。疫病防控单位需要组建实验室，并为实验室配备的检测仪器，配备的检测人员，进而提高实验室的检测能力和检测水平。

　原位杂交涉及的步骤：玻片的准备和样品固定，细胞或***的预渗透处理，靶DNA变性（DNA原位杂交），探针制备，原位杂交过程，杂交后洗涤，探针（显色）检测。

　　玻片的准备和样品固定

　　对于染色体涂片，1：1的乙醇/醚处理的载玻片已能符合要求。对于***切片的原位杂交，为了在实验过程中不丢失***样品，可使用多聚赖氨酸或铬矾明胶包被的载玻片。

　　样品的固定步骤是为了保持样品的原有形态学。样品固定是原位杂交中的步骤，从化学反应角度来看，固定剂的使用和选择对后续杂交的影响不会太大，因为核酸杂交的功能分子基团被安全地包裹在DNA双螺旋结构中，而交联剂的使用对RNA基本没有影响。对于染色体涂片，常使用/固定；石蜡包埋的***切片用固定。冷冻切片可通过在4%的甲醛溶液中固定30min，或使用Bouin固定剂。

　***=150mMN***,15mM柠檬酸钠溶液(pH7.4)

　　HCl处理：对样本进行20-30min的200mMHCl处理，可将蛋白抽提，并将核酸序列进行一定程度的水解，增加杂交检测的信噪比。

　　去垢剂处理：如果对样品的固定、脱水、包埋等预处理过程不足以将脂膜成分***暴露核酸，可对样品进行额外的蛋白去垢剂处理(如TritonX-100和SDS)。

　　蛋白酶处理：样品中待杂交的核酸序列常与蛋白缠绕交联在一起，样品的固定步骤更是加剧了蛋白的交联程度，因此预渗透是核酸杂交前的常规步骤，通常通过蛋白酶K的消化作用来完成。根据不同的文献来源，蛋白酶K的工作浓度通常设为10-500μg/ml(溶解于20mMTris-HCl,2mMC***2,pH7.4,酶浓度可根据具体样品进一步优化)，对样品进行37°C7.5–30min的处理。染色体涂片或核片的蛋白酶K处理浓度可降至1μg/ml消化7.5min。也有文献指出，固定石蜡包埋的***切片样品，使用胃蛋白酶（500μg/ml，溶于200mMHCl）将得到较好的蛋白消化结果。

1、致模因素对动物模型的影响

应明确研究目的，清楚相应人类***的发生、临床症状和发病机制，熟悉致病因素对动物所产生的临床症状和发病情况，致病因素的剂量。

2、动物因素对动物模型的影响  

品种、品系、年龄体重、性别、生理状态等

3、实验技术因素对动物模型的影响

实验季节、昼夜过程、深度、***技巧、实验给药、对照组的影响等。

4、环境因素和营养因素对动物模型的影响

模型的成败往往与环境的改变有密切关系。拥挤、饮食改变、过度光照、噪音、屏障系统的***等，任何一项被忽视都可能给模型动物带来严重影响。