实验小鼠血浆取材要求

　　血液必须在采血时或采血后立即与剂充分混合。采血时与抗凝剂混合方法：用于血液收集的无菌1mL可以将1mL剂从小瓶吸入，然后将全部剂重新注回小瓶，即在采血前用剂“灌注”采血的。采血后与抗凝剂混合方法：向1.5mL离心管中加入不超过150μL的抗凝剂。在相对离心力14000g下离心血样10-15分。用移液管吸取分离的血浆，并转移到干净的离心管中。可将血浆样本在14000g下再离心2-3分钟，以分离任何剩余的红细胞。将分离好的血浆转移到干净的离心管中。

***元原代培养是将胚胎哺乳动物***系统的部分***，如大脑皮层、海马、脊髓等脑***直接取出，再接种培养的方法。目前国内、外有关***元培养的方法较多，但在原代培养中***元的纯度和产量方面还存在一些急待解决的问题。由于***元是一种高度分化的细胞，相对于其它细胞而言，***元在体外更难以存活和生长。因此，体外培养***元要求的培养方法和营养条件均较为特殊。

***细胞的体外培养技术是研究***源性***的发病机制、进程的一个重要工具，能很好的、直观的反映离体***元的发育状况和生理活性，如何建立一个稳定成熟的***细胞培养体系是***系统***体外实验研究顺利进行的基础。随着基础***及临床***研究的逐渐深入，***细胞的体外培养技术在脑损伤、******、***相关******方面得到广泛重视和普及应用。

　***=150mMN***,15mM柠檬酸钠溶液(pH7.4)

　　HCl处理：对样本进行20-30min的200mMHCl处理，可将蛋白抽提，并将核酸序列进行一定程度的水解，增加杂交检测的信噪比。

　　去垢剂处理：如果对样品的固定、脱水、包埋等预处理过程不足以将脂膜成分***暴露核酸，可对样品进行额外的蛋白去垢剂处理(如TritonX-100和SDS)。

　　蛋白酶处理：样品中待杂交的核酸序列常与蛋白缠绕交联在一起，样品的固定步骤更是加剧了蛋白的交联程度，因此预渗透是核酸杂交前的常规步骤，通常通过蛋白酶K的消化作用来完成。根据不同的文献来源，蛋白酶K的工作浓度通常设为10-500μg/ml(溶解于20mMTris-HCl,2mMC***2,pH7.4,酶浓度可根据具体样品进一步优化)，对样品进行37°C7.5–30min的处理。染色体涂片或核片的蛋白酶K处理浓度可降至1μg/ml消化7.5min。也有文献指出，固定石蜡包埋的***切片样品，使用胃蛋白酶（500μg/ml，溶于200mMHCl）将得到较好的蛋白消化结果。