动物实验检测的取材要求介绍：

　　实验小鼠取材要求

　　采血后，立即将血液放入1.5mL离心管(不需加抗凝剂或防腐剂)。让血液在室温下静置30-60分钟。在相对离心力（relativecentrifugalforce，RCF）14000g下离心血样10-15分钟，用移液管吸取分离，并转移到干净的离心管中。可将样本在14000g下再离心2-3分钟，以分离任何剩余的红细胞。将分离好的转移到干净的离心管中。

　***=150mMN***,15mM柠檬酸钠溶液(pH7.4)

　　HCl处理：对样本进行20-30min的200mMHCl处理，可将蛋白抽提，并将核酸序列进行一定程度的水解，增加杂交检测的信噪比。

　　去垢剂处理：如果对样品的固定、脱水、包埋等预处理过程不足以将脂膜成分***暴露核酸，可对样品进行额外的蛋白去垢剂处理(如TritonX-100和SDS)。

　　蛋白酶处理：样品中待杂交的核酸序列常与蛋白缠绕交联在一起，样品的固定步骤更是加剧了蛋白的交联程度，因此预渗透是核酸杂交前的常规步骤，通常通过蛋白酶K的消化作用来完成。根据不同的文献来源，蛋白酶K的工作浓度通常设为10-500μg/ml(溶解于20mMTris-HCl,2mMC***2,pH7.4,酶浓度可根据具体样品进一步优化)，对样品进行37°C7.5–30min的处理。染色体涂片或核片的蛋白酶K处理浓度可降至1μg/ml消化7.5min。也有文献指出，固定石蜡包埋的***切片样品，使用胃蛋白酶（500μg/ml，溶于200mMHCl）将得到较好的蛋白消化结果。

肝纤维化动物模型造模方法：

1.法：

性肝纤维化产生的机理是Ⅲ型反应引起，白蛋白和的大分子物质，作为异种抗原进入大鼠体内后，刺激其产生相应的，当抗原再次进人机体后抗原结合，形成抗原—复合物(IC)，抗原的反复、长期刺激，过量的复合物来不及被清除，沉积于的血管壁内外，引起血管炎，造成肝损伤。反复导致肝细胞变性、坏死，再生，纤维等变化，后发展为肝纤维化、。

动物选用雄性Wistar大鼠，体重130g左右。取猪0.5ml，腹腔内***，每周2次，共8次(猪的制备：取新鲜猪血，离心制，滤过，分装放低温冰箱备用)。

评价:

大鼠第3周出现肝细胞变性、坏死，第4周的胶原纤维形成纤维束，从***静脉到门管区之间相互伸延，发生纤维化。