(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。

(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分钟振荡一次；

(4)去掉上清，加入终止液终止消化，吹打10-15次，不能有气泡，收集上清，剩余***再消化一次。

(5)4℃1000rpm离心10min，弃上清，加入种植液1重悬，培养箱内差速贴壁30min；

(6)收集上清，台盼蓝染色计数，按6*105cells/孔种入六孔板（种植液1），37℃，5%CO2，95%饱和湿度的培养箱中培养；

(7)培养第二天，全换液更换为种植液2；

(8)培养第四天，半量换液加入5uM的，24h全量换液；

(9)之后每周换液两次。

肝纤维化动物模型

模型概述：

1. 任何可引起肝损伤的因素长期、反复作用于，均可产生肝细胞变性、坏死，继而肝和纤维***，导致肝纤维化。

2. 已有化学性损伤、性、生物学、酒精性和营养性肝纤维化模型。每种方法因致病因素不同，给药途径不同，产生的机理、纤维化出现早晚、稳定性、出现率、重复性及机体自然患病过程相似程度等都不尽相同。

肝纤维化动物模型特点：

①肝纤维化出现早，出现率高；

②动物整体损伤轻微，毛发、生长情况正常；

③纤维化***中大量胶原，Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA增多。

慢性活动性患者循环复合物多为阳性，猪模型可用于慢性所致肝纤维化的研究，对于研究复合物的形成，沉积和清除及对于防治损伤性肝纤维化有效的筛选，具有意义。

（IDA）发生的主要原因是由于铁的摄入不足和/或铁丢失过多，引起机体血红蛋白合成障碍导

致。IDA模型有大鼠、小鼠、兔、鸡、猫、狗、猴等，其中以大鼠为常用。

动物模型方法：

1. 给予低铁饮食。饲料含铁量≥50mg/kg能满足大鼠的基本需要，低铁饲料的铁含量≤10mg/kg，标准饲

料铁含量为220-270mg/kg。饲料配方以酪蛋白或脱脂奶粉作为蛋白来源，玉米淀粉或蔗糖作为碳水化合物来源，加入植物油，混合***和混合无机盐配制。

近来通过络合剂1%EDTA-2Na除去国产饲料中的铁，取得满意的实验结果。

2. 给动物逐次少量放血，造成铁的慢性丢失。通常采用剪尾的方法，一方面放血不但引起铁的丢失，而且还可以引起其它营养素的丢失；另一方面剪尾易

引起动物而。

3. 低铁饮食辅以定期少量放血。