肺缺血再灌注损伤是由于机体***或在缺血再灌注后导致肺***迅速损伤。缺血再灌注可能发生在肺,也可能是下肢或腹主动脉等,导致肺泡上皮细胞和肺毛细胞血管内皮细胞受损。
究其原因可能与***细胞聚集、氧自由基产生和促炎因子释放等病理生理反应有关。
结扎法制备肺缺血再灌注损伤模型常用,因其操作简单、成功率高、实用性强,是研究肺缺血再灌注损伤发病机制和防治保护的关键。
制备肺缺血再灌注模型我们选用适龄的SD大鼠,通过结扎***进行造模。
(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。
(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。
(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小,消化液37℃消化15-20min,每五分钟振荡一次;
(4)去掉上清,加入终止液终止消化,吹打10-15次,不能有气泡,收集上清,剩余***再消化一次。
(5)4℃1000rpm离心10min,弃上清,加入种植液1重悬,培养箱内差速贴壁30min;
(6)收集上清,台盼蓝染色计数,按6*105cells/孔种入六孔板(种植液1),37℃,5%CO2,95%饱和湿度的培养箱中培养;
(7)培养第二天,全换液更换为种植液2;
(8)培养第四天,半量换液加入5uM的,24h全量换液;
(9)之后每周换液两次。
肝纤维化动物模型法:
180~200g Wistar或SD大鼠,皮射40%-50%CCl4,油溶液(0.3ml/100g),每周2次,第2周 始,隔日以20%-30%酒精lml灌胃(或作为饮料),饲以单纯玉米面(混以0.5%胆固醇),共10周。
评价:第2周出现小叶中心小片状肝细胞变性坏死, 第4周开始有较薄的纤维间隔形成,第6周间隔进一步增厚,有假小叶形成:第8周形成厚的纤维间隔,分割形成假小叶。大鼠成活率60%-80%。
该模型是目前国内外常采用的动物模型,可靠且时间短,肝纤维化进展稳定,适合于过程的动态研究。
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