与血浆储存要求

　　大多数生化分析好的时间是收集后2小时内在室温下进行分析。如果或血浆样品不能在收集后2小时内进行处理，可将样品（放在加盖的试管中）放入4℃冰箱中短期储存（1周）或放入20℃或更冷的冰箱中长期储存（1周至6个月）。但有些指标检测例外，例如氨、乳酸盐和血气分析需要在采集后并在冰浴或4°C立即被分析。胆红素在暴露于直射光时会降解，因此血液用于胆红素分析应该避光（可用铝箔包裹离心管）。检测乳酸脱氢酶建议室温储存。

肺缺血再灌注损伤是由于机体***或在缺血再灌注后导致肺***迅速损伤。缺血再灌注可能发生在肺，也可能是下肢或腹主动脉等，导致肺泡上皮细胞和肺毛细胞血管内皮细胞受损。

究其原因可能与***细胞聚集、氧自由基产生和促炎因子释放等病理生理反应有关。

结扎法制备肺缺血再灌注损伤模型常用，因其操作简单、成功率高、实用性强，是研究肺缺血再灌注损伤发病机制和防治保护的关键。

制备肺缺血再灌注模型我们选用适龄的SD大鼠，通过结扎***进行造模。

(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。

(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分钟振荡一次；

(4)去掉上清，加入终止液终止消化，吹打10-15次，不能有气泡，收集上清，剩余***再消化一次。

(5)4℃1000rpm离心10min，弃上清，加入种植液1重悬，培养箱内差速贴壁30min；

(6)收集上清，台盼蓝染色计数，按6*105cells/孔种入六孔板（种植液1），37℃，5%CO2，95%饱和湿度的培养箱中培养；

(7)培养第二天，全换液更换为种植液2；

(8)培养第四天，半量换液加入5uM的，24h全量换液；

(9)之后每周换液两次。