原位杂交电话「思特进」
作者:思特进2022/3/24 1:44:34






原位杂交是指;分子杂交的一种形式。由未经抽提分离的染色体DNA,在原来位置上被变性成单链后,与探针进行分子杂交。1977年由本顿(W.D.Benton)和戴维斯(R.W.D***is)在原分子杂交基础上发展的一种较新的分子杂交技术。方法是将菌落或噬菌斑转移到硝9酸纤维素滤膜上,使在原位发生溶菌后变性的DNA,同滤膜原位结合,再与有放5射性同位素标记的特定核苷酸“探针”杂交,其结果可用放5射自显影来显示,出现银粒的地方便是待测染色体DNA上与探针互补顺序所在的位置。对快速检测转化群落中的DNA序列或任何一种插入的DNA序列,以及动植物的******工作,都具有广泛应用价值。(见“分子杂交”、“放5射自显影”、“影印培养技术”)




原位杂交(In Situ Hybridization)也叫原位杂交组化(in situ hybridization histochemistry, ISHH),是一种固相分子杂交的方法,bai它是用标记的DNA或RNA为探针,在原位检测***或细胞内特定核酸序列的方法。探针的种类按所带标记物可分为同位素标记探针和非同位素标记探针两大类。常用的同位素标记物有3H、35S、125I和32P,非同位素标记物中目前很常用的有生物素、地高6辛和荧光素三种。探针的种类按核酸性质不同又可分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针和合成寡核苷酸探针。

原位杂交术可在原位检测细胞合成某种多肽或蛋白质的***表达,有很高的敏***和特异性,已成为细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。




原位杂交***(或细胞)化学技术简称原位杂交(In situ hybridization, ISH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与***细胞内待测的核酸,按碱基互补配对原则进行特异性结合,形成杂交体,然后用与标记物相应的检测系统,通过***化学或免3疫***化学方法在核酸原有位置进行细胞内***、定性和定量研究。为分子水平研究细胞内***表达及有关细胞5因子的调控提供了有效的工具。可视为***化学与免3疫***化学的重大突破。

原位杂交不需要从***中提取核酸,对于***中含量极低的靶序列有极高的敏***,并可完整地保护***和细胞的形态,更能准确地反映出***细胞的相互关系及功能状态。





总的来说,随探针浓度增加,杂交率也增加。另外,在较窄的范围内,随探针浓度增加,敏***增加。依我们的经验,要获得较满意的敏***,膜杂交中32P标记探针与非放0射性标记探针的用量分别为5~10 ng/ml和25~1000ng/ml,而原位杂交中,无论应用何种标记探针,其用量均为0.5~5.0μg/ml。探针的任何内在物理特性均不影响其使用浓度,但受不同类型标记物的固相支持物的非特异结合特性的影响。



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