武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。通过荧光原位杂交(FISH)技术检测尿液内脱落细胞染色体异常情况,以提高早期诊断率,减少患者膀胱镜检查次数。
用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的***表达。此方法有很高的敏***和特异性,可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。预杂交1)每个管中置换成大约300ulHYB-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。
结果 86例患者中有68例FISH检测结果为阳性,剩余18例FISH检测为阴性的患者中有10例为小于5mm的Ta期浅表。②***中病毒DNA/RNA的检测和***,如EB病毒mRNA、人类状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测。与病理学检查结果比较,FISH检测的特异性为100%,敏***为87%。FISH检测结果发现T1及T2期细胞染色体异常数目明显高于Ta期膀胱(P<0.05),但在T1及T2期膀胱间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 FISH检测具有敏***高、特异性强、无创伤等优点,在初步诊断及监测方面具有较好的临床应用前景,有可能成为简便、有效的初筛指标之一。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。例如,对致密染色体DNA的原位杂交可用于显示按规定序列的位置,对分裂期间核DNA的杂交可研究特定序列在染色质内的功能排布。显色以下各步均在室温下进行。
(1)缓冲液I洗1min。
(2)用含2%正常羊和0.3%TritonX-100的缓冲液I孵育切片30min。
(3)用含1%正常羊和0.3%TronX-100的缓冲液I稀释羊抗Dig。
(4)将稀释液滴加在切片上,封口膜覆盖,湿盒内4℃孵育过夜。
(5)缓冲液I洗10min。
(6)缓冲液Ⅱ洗10min。
(7)加显色液,封口膜覆盖,避光室温孵育2~20h,随时镜检,当显色满意时入缓冲液Ⅲ终止显色。
显色液临用前配,其配方为:①NBT 45μl;②X-Phospllate液 35μl;③左旋咪唑 2.4mg;④缓冲液Ⅱ 加至10ml。
(8)常规脱水、透明、封固。
结果:杂交阳性信号为紫蓝色颗粒。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。1molPBS洗三次,2×***洗10min,滴加预杂交液室温孵育1h。
阴性对照用已知不存在相应靶序列的***标本杂交,结果应为阴性。阴性对照可排除在杂交过程中由于非特异性杂交反应等因素造成的假阳性结果。
阳性对照用已知含靶序列的***切片与待检标本同样处理,结果应为阳性,称阳性对照。近研究结果表明,寡核苷酸探针(16-30nt)能自由出入***和***细胞壁,杂交效率明显高于长探针,因此,寡核苷酸探针和不对称PCR标记的小DNA探针或体外转录标记的RNA探针是***原位杂交优选探针。通过阳性对照可证明杂交过程中各个步骤以及所使用的***都合乎标准,实验方法可靠。尤其当待检标本为阴性时,阳性对照片呈阳性反应可排除待检标本假阴性的可能。故若预期杂交结果为阴性时,就必须设阳性对照,当阳性对照亦不显色,就证明杂交过程的某一步骤或所用***问题。
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