动物***原位杂交电话「思特进」
作者:思特进2022/2/27 7:10:56






原位杂交;原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或***中的核酸进行杂交,称为原位杂交!

使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在***或其他真核细胞中的位置。

以菌落原位杂交为例:对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行克8隆筛选时,可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝5酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。




原位杂交是指;分子杂交的一种形式。由未经抽提分离的染色体DNA,在原来位置上被变性成单链后,与探针进行分子杂交。1977年由本顿(W.D.Benton)和戴维斯(R.W.D***is)在原分子杂交基础上发展的一种较新的分子杂交技术。方法是将菌落或噬菌斑转移到硝9酸纤维素滤膜上,使在原位发生溶菌后变性的DNA,同滤膜原位结合,再与有放5射性同位素标记的特定核苷酸“探针”杂交,其结果可用放5射自显影来显示,出现银粒的地方便是待测染色体DNA上与探针互补顺序所在的位置。对快速检测转化群落中的DNA序列或任何一种插入的DNA序列,以及动植物的******工作,都具有广泛应用价值。(见“分子杂交”、“放5射自显影”、“影印培养技术”)





原位杂交中探针的选择

DNA探针、RNA探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短,因此避免了探针内部退火的问题,在杂交时的渗透能力也更好,探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。DNA探针、RNA探针在合成时需要控制探针片段长度,通常300-1000bp左右,能覆盖到较长片段的靶核酸序列,增加检测的灵敏度。







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