原位杂交;原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或***中的核酸进行杂交,称为原位杂交!
使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在***或其他真核细胞中的位置。
以菌落原位杂交为例:对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行克8隆筛选时,可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝5酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。
原位杂交技术基本原理
原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探针)与***、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在***、细胞或染色体上的位置显示出来。
为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件:***、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物。
原位杂交***(或细胞)化学技术简称原位杂交(In situ hybridization, ISH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与***细胞内待测的核酸,按碱基互补配对原则进行特异性结合,形成杂交体,然后用与标记物相应的检测系统,通过***化学或免3疫***化学方法在核酸原有位置进行细胞内***、定性和定量研究。为分子水平研究细胞内***表达及有关细胞5因子的调控提供了有效的工具。可视为***化学与免3疫***化学的重大突破。
原位杂交不需要从***中提取核酸,对于***中含量极低的靶序列有极高的敏***,并可完整地保护***和细胞的形态,更能准确地反映出***细胞的相互关系及功能状态。
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