原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或***切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精3确定量***的过程。原位杂交可以在细胞标本或***标本上进行。
原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)是分子生物学、***化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术,始于20世纪60年代。
原位PCR;原位杂交细胞***和PCR的高灵敏度相结合的技术,在细胞(爬片、甩片或涂片)或***(石蜡、冰冻切片)上直接对靶***片段进行扩增,通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。
就DNA探针和RNA探针的比较,DNA探针在杂交过程中会出现探针双链之间退火的可能,也更倾向于在溶液中形成大分子的探针聚合体,从而影响其渗透能力。而RNA 探针的应用,将提高DNA-RNA杂交子的热稳定性。
Tips:RNA探针因其单链、高分子结合力、可适应高温杂交的特性,其检测特异性和灵敏度均优于DNA探针。常用的RNA探针标记方法为构建质粒后进行转率合成。通过PCR扩增的方法,可以更方便地进行RNA探针的制备;RNA探针合成后,还需验证其对目标片段检测的灵敏度和特异性。
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