武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。
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同其他的生物技术一样,原位杂交技术在其发展与应用的过程中会出现一些问题,但随着原位杂交技术的不断改进与完善以及检测手段的改进,原位杂交技术的优越性越来越突出,其应用也会更加广泛。
荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization, FISH)技术问世于20世纪70年代后期,其基本原理是利用标记了荧光素的核酸作为探针,按照碱基互补原则,与待检样本中与之互补的核酸经过变性-退火而形成杂交双链核酸,通过荧光显微镜进行检测和分析。基本原理是荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火温度下复性。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;荧光原位杂交(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)技术是在已有的性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性DNA分子原位杂交技术。公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。
***切片与预处理
冰冻切片:新鲜***也可在取材后,直接置入液氮中迅速骤冷,冷冻切片后,4%多聚甲醛固定5~10min,也可保存在-70℃中待用。杂交前切片迅速***至室温并干燥,0.1mol PBS洗三次,2×***洗10min,滴加预杂交液室温孵育1h。
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RNA原位 核酸杂交又称RNA 原位杂交***化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或 寡核苷酸等探针检测细胞和***内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或***结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按 核酸杂交中 碱基配对原则,与待测细胞或***中相应的***片段相结合(杂交),所形成的 杂交体 (Hybrids)经 显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的***表达。RNA原位杂交技术 经不断改进,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在 ***分析和诊断方面能作定性、***和定量分析,已成为有效的 分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。
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FISH是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被 荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入临床诊断领域。基本原理是 荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火 温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶核酸进行分析。DNA荧光标记探针是其中较常用的一类核酸探针。利用此探针可对***、细胞或染色体中的DNA进行染色体及 ***水平 的分析。③FISH通过多次化学反应,使杂交信号增强,灵敏度提高,其灵敏度与性探针相当。荧光标记探针不对环境构成污染,灵敏度能得到保障,可进行多色观察分析,因而可同时使用多个探针,缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。