原位杂交；原位杂交（in situ hybridization）将标记的核酸探针与细胞或***中的核酸进行杂交，称为原位杂交！

使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在***或其他真核细胞中的位置。

以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克8隆筛选时，可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝5酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

原位杂交***（或细胞）化学技术简称原位杂交（In situ hybridization, ISH）是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与***细胞内待测的核酸，按碱基互补配对原则进行特异性结合，形成杂交体，然后用与标记物相应的检测系统，通过***化学或免3疫***化学方法在核酸原有位置进行细胞内***、定性和定量研究。为分子水平研究细胞内***表达及有关细胞5因子的调控提供了有效的工具。可视为***化学与免3疫***化学的重大突破。

原位杂交不需要从***中提取核酸，对于***中含量极低的靶序列有极高的敏***，并可完整地保护***和细胞的形态，更能准确地反映出***细胞的相互关系及功能状态。

总的来说，随探针浓度增加，杂交率也增加。另外，在较窄的范围内，随探针浓度增加，敏***增加。依我们的经验，要获得较满意的敏***，膜杂交中32P标记探针与非放0射性标记探针的用量分别为5～10 ng/ml和25～1000ng/ml，而原位杂交中，无论应用何种标记探针，其用量均为0.5～5.0μg/ml。探针的任何内在物理特性均不影响其使用浓度，但受不同类型标记物的固相支持物的非特异结合特性的影响。



在选择探针类型的同时，还需要选择标记方法。探针的标记方法很多，选择什么标记方法主要视个人的习惯和可利用条件而定。但在选择标记方法时，还应考虑实验的要求，如灵敏度和显示方法等。一般认为放0射性探针比非放0射性探针的灵敏度高。放0射性探针的实际灵敏度不依赖于所采用的标记方法，如随机引物延伸法往往得到比缺口平移法更高的比活性 。在检测单拷贝***序列时，应选用标记效0率0高、显示灵敏的探针标记方法。在对灵敏要求不高时，可采用保存时间长的生物素探针技术和比较稳定的碱性磷酸酶显示系统。