原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或***切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精3确定量***的过程。原位杂交可以在细胞标本或***标本上进行。

原位杂交技术(In situ hybridization，ISH)是分子生物学、***化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术，始于20世纪60年代。

原位PCR；原位杂交细胞***和PCR的高灵敏度相结合的技术，在细胞（爬片、甩片或涂片）或***（石蜡、冰冻切片）上直接对靶***片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。

原位杂交试验

收集斑马鱼的胚胎，在Holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小时后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗，然后换成甲9醇，在-20C 保存，待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧6水处理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养，可阻断色素的形成)

原位杂交中探针的选择

DNA探针、RNA探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短，因此避免了探针内部退火的问题，在杂交时的渗透能力也更好，探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。DNA探针、RNA探针在合成时需要控制探针片段长度，通常300-1000bp左右，能覆盖到较长片段的靶核酸序列，增加检测的灵敏度。

杂交流程

杂交液的成分主要影响了核酸杂交的复性动力学和热稳定性。杂交液的基础成分为：Denhardt’s溶液（Ficoll，BSA，PVP），异源核酸（如鲱精3子DNA/tRNA/竞争DNA），磷酸钠，EDTA，SDS，盐离子，甲酰胺和***葡聚糖，以及杂交探针。不同的应用中进行杂交温度、pH、盐离子、甲酰胺、探针浓度等条件的优化。常用的pH范围为6.5~7.5，较高的pH值有助于提高杂交的严谨性。