细胞实验介绍——细胞运动能力检测:
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。
一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照
细胞迁移和侵袭实验是体外模拟细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚碳酸酯膜transwell小室放入培养板中,将细胞接种于小室中,利用培养液成分的差异诱导细胞运动,检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。
一般流程:transwell小室准备-细胞接种-细胞培养-transwell小室染色-显微镜拍照
结果示例:
图 A 细胞划痕实验图;B,C 细胞迁移和侵袭实验图
细胞增殖检测
本公司应用MTT比色法, 检测细胞存活和生长。其检测原理为huo细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源性无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二jia基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的Formazan,用酶联mian疫检测仪在一定波长处测定其光吸收值,可间接反映huo细胞数量。3、利用WesternBlot检测LC3-II/比值的变化以评价自噬形成自噬形成时,胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-ID,因此,LC3-II/比值的大小可估计自噬水平的高低。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿liu药wu筛选、细胞毒性试验、以及肿liu放she敏***测定等。服务内容 1. 细胞接种:收到客户细胞后,我们会用细胞计数板计数细胞,得出细胞悬液浓度。它能指示某一yao物或者物质(yi制剂)在***某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质,比如酶,细胞受体或是微生物)的半量。计算出应稀释的倍数,按MTT***盒要求在96孔板内接种 相应浓度的细胞悬液;
2. 细胞培养:然后在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板,并实时观察细胞状态;
3. yao物处理并呈色:按不同浓度梯度加入yao物作用细胞;
4. 溶解,比色:加入MTT检测***,按操作要求孵育相应时间,在mei标仪内检测对照组和实验组的吸光值。并处理数据得出比色结果。
自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物,损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、
病毒和***等。单丹磺酰尸胺(Dansylcad***erine,MDC是一种荧光色素,是嗜酸性染色剂,通常被于检测自噬体形成的特异性标记染色剂,其检测激发滤光片波长355nm ,阻断滤光片波长512nm。yao物对细胞的IC50检测IC50(halfmaximalinhibitoryconcentration)是指被测量的拮抗剂的半***浓度。Leagene MDC染色液适用于培养细胞的自噬染色,可与EB合用双染。
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