对于生长的***培养液中的细胞，首先移除培养基，然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解；如果裂解不充分，接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心，收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和***裂解。在这个浓度范围内，去污剂并不干扰试验的结合部位，但是会适度的增加光密度值。含有Triton的样品需利用标准曲线估计浓度，为了较精l确的测定，标准曲线需以相同方式稀释。取1 mL细胞培养上清加入10μL浓盐酸，600g离心力于室温离心，上清液直接用于实验测定分析。

武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和***等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往世界。




***准备

   非乙酰化cGMP标准品将5000 pmol/mL cGMP标准品溶液平衡至室温。从#1至#7标记六只洁净试管。移取475μL 0.1M HCl到#1号试管，400μL到#2至#7号试管。加入25μL 5000 pmol/mL cGMP标准品到#1管中，剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μL溶液至#2管中，涡旋震荡。以此类推，重复上步操作，梯度稀释至#7管。

   经以上操作，#1至#6管中cGMP标准品浓度分别为250,50，10,2,0.4，0.08和0.016 pmol/mL（详见cGMP加样表）。稀释过的标准品需在30分钟内使用。

   标记一只试管作为无标准品空白对照（NSB）。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。

    洗涤液将15 mL 10×洗涤液储液加到135 mL去离子水中，稀释成工作液。稀释液可在室温保存至***盒有效期限，或者3个月。

ELISA***盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测***盒、ELISA Kit、酶联免l疫***盒、酶联免l疫吸附测定***盒、酶联免l疫分析***盒、酶免***盒等，比较常见的叫法是ELISA检测***盒、酶联免l疫吸附测定***盒等。ELISA***盒自从60-70年代问世以来，得到全世界科研工作者的认可及推崇，在欧美及中国获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。

洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

底物是光敏感的，要在临用前现配。

检测前，要打开酶l标仪，使之稳定10分钟以上。

底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

待检样品要澄清，否则会影响结果。

温浴时间应遵守***盒规定。

应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。

对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。