对于生长的***培养液中的细胞，首先移除培养基，然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解；如果裂解不充分，接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心，收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和***裂解。在这个浓度范围内，去污剂并不干扰试验的结合部位，但是会适度的增加光密度值。含有Triton的样品需利用标准曲线估计浓度，为了较精l确的测定，标准曲线需以相同方式稀释。取1 mL细胞培养上清加入10μL浓盐酸，600g离心力于室温离心，上清液直接用于实验测定分析。

线性关系

cAMP浓度为16.0pmol/mL的样品，用0.1M HCl进行连续七次1:2梯度稀释。将实际的cAMP浓度和测定的cAMP浓度绘制图表。该直线的斜率为1.000，相关系数为0.999。

交叉反应

部分相关化合物的交叉反应由竞争ELISA测定。将可能的交叉反应物溶解到***盒分析缓冲液中，浓度从500pmol/mL至500,000pmol/mL。这些样品通过乙酰化在cAMP竞争分析中被测定，通过比较样品中交叉***的实际浓度，可以计算出交叉反应，并用百分比(%)表示。

武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等。

酶标记抗l体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗l体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗l体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

Ras活性分析。纯化的Ras蛋白分别用GDP (Lane 1)和GTPγS (Lane 2)进行活化。然后用特异性识别Ras活性构象的鼠单克l隆抗l体(Cat. # 26909)孵育。活性Ras珠子颗粒用特异性识别Ras活性构象的兔多克l隆抗l体(Cat # 21021)进行免l疫印迹实验。图展示的是Ras-GDP和Ras-GTPγS的Western blot实验结果。