注意步骤

1. 在使用前，将所有***放置30分钟，平衡至室温。

2. 用***预先润洗头在使用；取各种样品、标准品和***必需更换头。

3. 移取标准品和样品到微孔底部。

4. 从微孔的边缘加入***，以避免污染。

5. 本***盒使用可拆分的微孔酶标条，使用者可根据样品量多少进行拆分。未使用的酶标条保持干燥，密封于***盒提供的铝封袋中，于4℃保存。微孔酶标条需安装在相应的框架上使用。

6. 在加入显色底物前，确保微孔内没有残留的洗涤液。微量残留的洗涤液可能导致分析结果的变化。

实验步骤

使用前将各种***取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。

快速加入***至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。

1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各个微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP标准品)。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔。7. 移取50μL 偶联酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

8. 移取50μL 抗l体工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。

9. 将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。

10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以确保没有洗涤液残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。（显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。）

14. 每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。

15. 清除酶标l仪Blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。

因此为筛选出腺苷酸环化酶的激l活剂或磷酸二酯酶的***l剂，需要一个高敏感度、特异性的、可重复的方案用于检测cGMP的含量。考虑到大分子的化合物可能存在较弱的影响，这一个初筛是有必要的。

目前商业化提供的一些cGMP检测***盒主要使用的是非亲和纯化的cGMP多克l隆抗l体。尽管据称有特异性，但这些多克l隆抗cGMP抗l体与cAMP和GTP呈现一定程度的交叉反应。且在大多数细胞类型中，cGMP含量低于cAMP 100倍。

武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和***等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往世界。

稳定性

酶联免l疫吸附***盒的稳定性由失活率决定。这个工具箱的损失率在适当的储存条件下，在有效期内少于10%。

为减少对性能的额外影响，操作程序和实验室条件，特别是室温、空气湿度、培养箱温度应严格控制受约束的。强烈建议由同一个操作员从从开始到结束。