免l疫测定技术的基础在于抗原抗l体之间的特异结合反应，所以任何好的诊断l***离不开好的原料，如抗原抗l体，酶等。以前用于免l疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗l体则为纯化抗原免l疫动物后获得的多克l隆抗l体和使用杂交瘤技术得到的单克l隆抗l体，而抗原或抗l体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用***工程方法制备各种特殊的抗原或抗l体及其酶结合物等免l疫测定***几成为现实的新一代***，各种新型使用的测定方法也不断出现。






ELISA的基础是抗原或抗l体的固相化及抗原或抗l体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗l体仍保持其免l疫学活性，酶标记的抗原或抗l体既保留其免l疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗l体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗l体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗l体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗l体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免l疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗l体。然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的才能充分发挥其方法学的优点。




包被抗l体（或抗原）的选择：将抗l体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的较适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值较大而蛋白量较少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。

将液体加到酶标孔中时，避免头和孔内液体接触，可使头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶l标仪的晃动功能。

温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加。没有洗板l机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。