纽斯特生物的ELISA***盒适用于检测经过盐酸处理而终止内源性磷酸二酯酶活性的cAMP样品。这种样品可直接应用于检测,而不需要蒸发和进一步的处理。
***样本需预先冰冻于液氮中。在不锈钢研钵中用液氮将组子样本研磨成精细粉末。待液氮挥发完后,称量冰冻***样本并加入10倍体积的0.1M HCl混匀。室温以大于600g离心力离心,取上层清夜用0.1M HCl稀释至适当浓度。
因此为筛选出腺苷酸环化酶的激l活剂或磷酸二酯酶的***l剂,需要一个高敏感度、特异性的、可重复的方案用于检测cGMP的含量。考虑到大分子的化合物可能存在较弱的影响,这一个初筛是有必要的。
目前商业化提供的一些cGMP检测***盒主要使用的是非亲和纯化的cGMP多克l隆抗l体。尽管据称有特异性,但这些多克l隆抗cGMP抗l体与cAMP和GTP呈现一定程度的交叉反应。且在大多数细胞类型中,cGMP含量低于cAMP 100倍。
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