***盒储存要求

本***盒所有组分在有效期限内，于4℃稳定保存。为了长效的实验，1000×储液请保存于-80℃。本***盒未提供的必需***

1. 去离子水或蒸馏水。

2. 浓盐酸。

3. 量程在5μL至1000μL之间的精密移液管。

4. 量程为50μL和200μL的中继移液器。

5. 用于稀释储液的一次性烧杯。

6. 刻度量筒。

7. 微孔板振荡器。

8. 吸水纸。

9. 酶标l仪，可读波长450nm，在570nm至590nm之间应有修正。

纽斯特生物的ELISA***盒适用于检测经过盐酸处理而终止内源性磷酸二酯酶活性的cAMP样品。这种样品可直接应用于检测，而不需要蒸发和进一步的处理。

***样本需预先冰冻于液氮中。在不锈钢研钵中用液氮将组子样本研磨成精细粉末。待液氮挥发完后，称量冰冻***样本并加入10倍体积的0.1M HCl混匀。室温以大于600g离心力离心，取上层清夜用0.1M HCl稀释至适当浓度。

结果计算

样品中cAMP浓度有多种计算方法。X轴表示cAMP标准品浓度，Y轴表示净光密度的平均值或者百分比值。

1 样品和标准品的净光密度(OD)平均值的计算：

净OD平均值 = OD平均值 － NSB孔OD平均值

2 计算不同梯度浓度标准品的结合率占较大结合率(B0孔)的百分比，计算公式 如下：

百分比值 = (净OD平均值/ B0孔OD平均值)×100

3 绘制净OD平均值或百分比值对cAMP标准品浓度的Logit-Log曲线。通过插值即可得到样品中cAMP浓度。

灵敏度

通过比较10个B0孔平均光密度值(OD)和10个5号管标准品的平均光密度值，计算出灵敏度。cAMP浓度的检测极限通过标准曲线上0位置的两个标准偏差来测定。

OD(B0平均数) =0.685± 0.003

OD（5号 标准品平均数）=0.604± 0.010

光密度偏差(0-0.4 pmol/mL) =0.081

2 SD's of the Zero Standard =0.006

灵敏度 =081.0006.0/0.8×0.4 pmol/mL =29.6 fmol/mL