本***盒利用竞争酶联免l疫分析方法来测定细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cAMP的水平。简而言之，将羊抗鼠多克l隆抗l体包被在酶标板上，细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cAMP与固定数量的偶联辣根过氧化物酶的cAMP或碱性磷酸酶竞争性的结合抗cAMP单克l隆抗l体，已知的cAMP作为标准品来做标准曲线。经过一段时间孵育，洗掉所有***，加入底物进行显色。将多孔板置于酶标l仪上，于450nm或405nm波长下，进行读数。***的光强度与样品中cAMP的浓度呈反比关系。基于cAMP标准品所得曲线，通过测得的光密度可以计算出样品中cAMP的浓度。

***盒储存要求

本***盒所有组分在有效期限内，于4℃稳定保存。为了长效的实验，1000×储液请保存于-80℃。本***盒未提供的必需***

1. 去离子水或蒸馏水。

2. 浓盐酸。

3. 量程在5μL至1000μL之间的精密移液管。

4. 量程为50μL和200μL的中继移液器。

5. 用于稀释储液的一次性烧杯。

6. 刻度量筒。

7. 微孔板振荡器。

8. 吸水纸。

9. 酶标l仪，可读波长450nm，在570nm至590nm之间应有修正。

结果计算

样品中cAMP浓度有多种计算方法。X轴表示cAMP标准品浓度，Y轴表示净光密度的平均值或者百分比值。

1 样品和标准品的净光密度(OD)平均值的计算：

净OD平均值 = OD平均值 － NSB孔OD平均值

2 计算不同梯度浓度标准品的结合率占较大结合率(B0孔)的百分比，计算公式 如下：

百分比值 = (净OD平均值/ B0孔OD平均值)×100

3 绘制净OD平均值或百分比值对cAMP标准品浓度的Logit-Log曲线。通过插值即可得到样品中cAMP浓度。