不管是哪一种ELISA，它的操作都由以下几种基本的操作组合而成：①将抗原或***吸附到固相载体上；②加入待检样品以及后续***；③温育；④洗涤去掉游离未结合的反应物；⑤加入酶检测底物；⑥结果的判读。

ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多。

测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。

测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因***盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线注意图中横坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达。

ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。

测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线***高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，***较呈直线的部分是***理想的检测区域。