***盒组成材料和***

1. 羊抗小鼠IgG包被的96孔微孔板一张 catalog No.30101

该微孔板将特异性识别小鼠IgG 的山羊抗l体包被于可拆分酶标条上。

2. cAMP偶联的辣根过氧化物酶工作液6 mL catalog No. 30102

本包装含1000×偶联酶储存液和稀释缓冲液。

3. 抗cAMP的小鼠单克l隆抗l体工作液6 mL catalog No. 26002-2

本包装含1000×抗l体储存液和稀释缓冲液。

注意：为了稳定和长效的实验，抗l体储存于-80℃。在使用前将6μL 1000×偶联酶储存液加入到6 mL 稀释缓冲液中配制为工作液，并轻轻混匀。工作液请避免反复冻融。

4. 中和液6 mL catalog No. 30103

5. 10×浓缩洗涤液15 mL catalog No. 30103

含去污剂的磷酸盐缓冲液。

6. cAMP标准品0.25 mL catalog No. 30203

浓度5000 pmol/ mL

7. 显色底物A，12 mL catalog No. 30107

8. 显色底物B, 12 mL。 catalog No. 30108

9. 终止液，6 mL； catalog No. 30110

注意：该溶液有腐蚀性；储存时请旋紧瓶盖

纽斯特生物的ELISA***盒适用于检测经过盐酸处理而终止内源性磷酸二酯酶活性的cAMP样品。这种样品可直接应用于检测，而不需要蒸发和进一步的处理。

***样本需预先冰冻于液氮中。在不锈钢研钵中用液氮将组子样本研磨成精细粉末。待液氮挥发完后，称量冰冻***样本并加入10倍体积的0.1M HCl混匀。室温以大于600g离心力离心，取上层清夜用0.1M HCl稀释至适当浓度。

对于生长的***培养液中的细胞，首先移除培养基，然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解；如果裂解不充分，接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心，收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和***裂解。在这个浓度范围内，去污剂并不干扰试验的结合部位，但是会适度的增加光密度值。含有Triton的样品需利用标准曲线估计浓度，为了较精l确的测定，标准曲线需以相同方式稀释。取1 mL细胞培养上清加入10μL浓盐酸，600g离心力于室温离心，上清液直接用于实验测定分析。