纽斯特生物的ELISA***盒适用于检测经过盐酸处理而终止内源性磷酸二酯酶活性的cAMP样品。这种样品可直接应用于检测,而不需要蒸发和进一步的处理。
***样本需预先冰冻于液氮中。在不锈钢研钵中用液氮将组子样本研磨成精细粉末。待液氮挥发完后,称量冰冻***样本并加入10倍体积的0.1M HCl混匀。室温以大于600g离心力离心,取上层清夜用0.1M HCl稀释至适当浓度。
结果计算
样品中cAMP浓度有多种计算方法。X轴表示cAMP标准品浓度,Y轴表示净光密度的平均值或者百分比值。
1 样品和标准品的净光密度(OD)平均值的计算:
净OD平均值 = OD平均值 - NSB孔OD平均值
2 计算不同梯度浓度标准品的结合率占较大结合率(B0孔)的百分比,计算公式 如下:
百分比值 = (净OD平均值/ B0孔OD平均值)×100
3 绘制净OD平均值或百分比值对cAMP标准品浓度的Logit-Log曲线。通过插值即可得到样品中cAMP浓度。
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