武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和***等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往各地。

NewEast Biosciences Arf6激l活检测***盒基于特定于配置的单克l隆抗l体和Arf6特异性兔多克l隆抗l体，该抗l体特异性识别Arf6-GTP，但不能识别Arf6-GDP。 鉴于单克l隆抗l体对其抗原的高度亲和力，可以在短时间内进行激l活测定。 该测定法可提供可靠的结果，并具有一致的可重复性。

阳性对照和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量

注意：体内细胞刺激将激l活可用Arf 6的大约10％，而体外GTPγS蛋白负载将激l活Arf 6的将近90％。

1，将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中（或使用1 μg纯化的Arf 6蛋白）。

2，向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA（终浓度为20 mM）。

3，将5 μl 100 XGTPγS（至100 μM，终浓度）加到一个试管中（阳性对照）。

4，在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP（至1 mM，终浓度）（阴性对照）。

5，在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。

6，通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2（至60 mM，终浓度）来停止加载。

电泳与转移

1.将15 μL /孔的下拉上清液加到聚丙l烯酰胺凝胶（17％）中。 而且，建议包含预先染色的MW标准（作为步骤3中成功转移的指标）。

2.按照制造商的说明执行SDS-PAGE。

3.按照制造商的说明将凝胶蛋白转移到PVDF或硝l酸纤维素膜上。