阳性对照和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量

注意：体内细胞刺激将激l活可用Arf 6的大约10％，而体外GTPγS蛋白负载将激l活Arf 6的将近90％。

1，将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中（或使用1 μg纯化的Arf 6蛋白）。

2，向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA（终浓度为20 mM）。

3，将5 μl 100 XGTPγS（至100 μM，终浓度）加到一个试管中（阳性对照）。

4，在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP（至1 mM，终浓度）（阴性对照）。

5，在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。

6，通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2（至60 mM，终浓度）来停止加载。

***符号：RAB11

说明：抗活性Rab11小鼠单克l隆抗l体

背景：Rab系列的小GTP酶是控制膜运输的机械的关键要素。 Rab11已显示可控制通过回收内体的运输。

免l疫原：活性Rab11的重组全长蛋白

应用范围：IP，IHC

推荐的稀释液：IP：1μg，用于1?2 mg总细胞蛋白

IHC：1：50?100稀释

浓度：1 mg / ml

格式：液体

同种型：IgG2b

纯度：从腹l水中纯化

存储缓冲区：

防腐剂：否

成分：PBS（不含Mg2 +和Ca2 +），pH 7.4、150 mM N***，50％甘油

种属反应性：抗活性Rab11抗l体识别来自脊椎动物的活性Rab11。

储存条件：储存于-20°C。 避免***/解冻周期

Arl1激l活试验。纯化的GST标记的Arl1蛋白用抗活性Arl1单克l隆抗l体（Cat。#26924）用GDP（车道1）或GTPγS（车道2）处理后，用抗Arl1单克l隆抗l体（Cat）进行印迹。#26056年）。显示Arl1蛋白输入控制在底部面板中。

产品描述

Arf样蛋白1（Arl1）是调节性gtpase家族中的一员，位于Ras中GTPases的超家族，在真核生物中具有高度保守的同源***。Arl1至关重要用于果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育。Arl1在一级序列，细胞位置和功能（膜交通的调节）到Arf1–6甚至共享几个共同的有约束力的合作伙伴。除了在膜交通中的作用高尔基/跨高尔基网络，有报道表明Arl1可能在离子稳态中起作用酵母。

目前还没有直接测定Arl1-gtpase活性的方法。NewEast Biosciences Arl1激l活检测***盒是基于特定构型的单克l隆抗l体特异性识别Arl1 GTP，但不识别Arl1 GDP的抗l体。鉴于单克l隆抗l体对其抗原，活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠，重现性一致。

一系列结构多样的配体，从光子到大肽，激l活GPCRs来激发它们的生理功能。配体结合的GPCRs，反过来，起到鸟呤核苷酸交换的作用Gβγ存在下Gα亚基上的GDP与GTP交换的催化因子，导致Gα亚单位与Gβγ二聚体分离形成两个功能单元（Gα和Gβγ）。Gα和Gβγ亚单位都向各种细胞信号通路发出信号。根据顺序与功能同源，G蛋白分为四个家族：Gs，Gi、Gq和G12。增加这些G蛋白的效应器和相互作用蛋白的数量已经被鉴定，生理上G蛋白参与的过程正在增殖。