测定步骤

I.主动Arf 6下拉分析

1.将0.5 – 1 mL细胞裂解液等分到微量离心管中。

2.使用1X分析/裂解缓冲液将每个样品的体积调整为1 mL。

3.在管中加入1 μl抗活性Arf 6单克l隆抗l体。

4.通过涡旋或滴定重悬蛋白A / G琼脂糖珠浆。

5.快速向每个管中添加20 μL重悬浮的珠浆。

6.轻轻搅拌将试管在4°C下孵育1小时。

7.通过以5,000 x g离心1分钟来沉淀小珠。

8.吸出并丢弃上清液，确保不要干扰/除去珠粒。

9.用0.5 mL的1X Assay / Lysis Buffer洗涤磁珠3次，每次离心并吸出。

10.后一次洗涤后，将珠粒沉淀并小心除去所有上清液。

11.将磁珠沉淀重悬于20 μL 2X还原SDS-PAGE样品缓冲液中。

12.将每个样品煮沸5分钟。

13.以5,000 x g的速度离心每个样品10秒钟。

Arl1激l活试验。纯化的GST标记的Arl1蛋白用抗活性Arl1单克l隆抗l体（Cat。#26924）用GDP（车道1）或GTPγS（车道2）处理后，用抗Arl1单克l隆抗l体（Cat）进行印迹。#26056年）。显示Arl1蛋白输入控制在底部面板中。

产品描述

Arf样蛋白1（Arl1）是调节性gtpase家族中的一员，位于Ras中GTPases的超家族，在真核生物中具有高度保守的同源***。Arl1至关重要用于果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育。Arl1在一级序列，细胞位置和功能（膜交通的调节）到Arf1–6甚至共享几个共同的有约束力的合作伙伴。除了在膜交通中的作用高尔基/跨高尔基网络，有报道表明Arl1可能在离子稳态中起作用酵母。

目前还没有直接测定Arl1-gtpase活性的方法。NewEast Biosciences Arl1激l活检测***盒是基于特定构型的单克l隆抗l体特异性识别Arl1 GTP，但不识别Arl1 GDP的抗l体。鉴于单克l隆抗l体对其抗原，活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠，重现性一致。

一系列结构多样的配体，从光子到大肽，激l活GPCRs来激发它们的生理功能。配体结合的GPCRs，反过来，起到鸟呤核苷酸交换的作用Gβγ存在下Gα亚基上的GDP与GTP交换的催化因子，导致Gα亚单位与Gβγ二聚体分离形成两个功能单元（Gα和Gβγ）。Gα和Gβγ亚单位都向各种细胞信号通路发出信号。根据顺序与功能同源，G蛋白分为四个家族：Gs，Gi、Gq和G12。增加这些G蛋白的效应器和相互作用蛋白的数量已经被鉴定，生理上G蛋白参与的过程正在增殖。

Gα13活化试验。MEF细胞分别用LPA（第2道）或不加LPA（1道）处理。细胞裂解物用抗活性Gα13单克l隆抗l体（Cat）孵育。#26902）（顶面板）。这个用抗Gα13兔多克l隆抗l体（Cat）免l疫印迹法检测沉淀活性Gα13#21005年）。底部的面板显示了用抗Gα13的细胞裂解物的Western blot（5%在顶部面板中使用的）。