这些抗Arf 6-GTP单克l隆抗l体还可用于通过免l疫***化学监测细胞和***中Arf 6的激l活。

NewEast Biosciences Arf6激l活测定***盒提供了一种简单且快速的方法来监测Arf 6的激l活。每个***盒均提供足够的量以执行20个测定。

NewEast Biosciences Arf 6激l活检测***盒基于特定于配置的抗Arf 6-GTP单克l隆抗l体，可从细胞提取物或体外载有GTPγS的Arf 6激l活检测方法来测量活性Arf 6-GTP水平。 简而言之，抗活性的Arf 6小鼠单克l隆抗l体将与含有Arf 6-GTP的细胞裂解液一起孵育。 然后，结合的活性Arf 6将被蛋白A / G琼脂糖拉低。 分别使用抗Arf 6兔多克l隆抗l体通过免l疫印迹分析检测沉淀的活性Arf 6。

 1.抗活性的Arl1，小鼠单克l隆抗l体（货号26924）：一小瓶–溶于pH 7.4的PBS中的22 μL（1mg / ml），含有50％甘油和0.05％叠氮l化钠。该抗l体特异性识别所有脊椎动物的Arl1-GTP。

2.蛋白A / G琼脂糖（目录号30301）：一小瓶– 400 μL 50％浆液。

3. 5X测定/裂解缓冲液（目录号30302）：一瓶– 30 mL的250 mM Tris-HCl，pH 8，750mM N***，50 mM MgCl2，5 mM EDTA，5％Triton X-100。

4.抗Arl1，小鼠单克l隆抗l体（目录号26056）：一小瓶– 100 μL（1 mg / ml）

pH 7.4的PBS中含有50％的甘油。

5. 100 XGTPγS（货号30303）：1瓶– 100 μl，10 mM，使用5 μLGTPγSGTP标记的0.5 mL细胞裂解物。

6. 100 X GDP（产品目录号30304）：一个样品瓶– 100 μl，100 mM，使用5 μL GDP

GDP标记的0.5 mL细胞裂解物。

1.刺激的和非刺激的细胞裂解液

2.蛋白酶***l剂

3. 4°C管摇杆或摇床

4. 0.5 M EDTA，pH8.0

5. 1 M氯化镁

6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液

7.电泳和免l疫印迹系统

8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，pH 7.4，0.15 M N***，0.05％Tween-20）

9.免l疫印迹封闭缓冲液（TBST包含5％脱脂奶粉或3％BSA）

10. PVDF或硝l酸纤维素膜

11.二抗

12. ECL检测***

?1X测定/裂解缓冲液：短暂混合5X储备液，并在去离子水中稀释至1X。 在使用前，添加蛋白酶***l剂，例如1 mM PMSF，10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。

检测原理

    武汉纽斯特生物技术有限公司的Cd***2活性检测***盒主要是利用识别蛋白特异形态的Cd***2-GTP单克l隆抗l体特异性的去检测细胞提取物或者体外的（样品需要进行GTPγS活化处理）活性Cd***2-GTP的水平。简言之，特异性识别Cd***2活化构象的鼠单克l隆抗l体可以特异性结合细胞裂解液中的Cd***2-GTP活性蛋白，然后利用protein A/G将抗原抗l体的结合物吸附下来，再利用特异性识别Cd***2活化构象的兔多克l隆抗l体进行免l疫印迹分析进行检测。

Gα13活化试验。MEF细胞分别用LPA（第2道）或不加LPA（1道）处理。细胞裂解物用抗活性Gα13单克l隆抗l体（Cat）孵育。#26902）（顶面板）。这个用抗Gα13兔多克l隆抗l体（Cat）免l疫印迹法检测沉淀活性Gα13#21005年）。底部的面板显示了用抗Gα13的细胞裂解物的Western blot（5%在顶部面板中使用的）。