NewEast Biosciences Arf6激l活检测***盒基于特定于配置的单克l隆抗l体和Arf6特异性兔多克l隆抗l体,该抗l体特异性识别Arf6-GTP,但不能识别Arf6-GDP。 鉴于单克l隆抗l体对其抗原的高度亲和力,可以在短时间内进行激l活测定。 该测定法可提供可靠的结果,并具有一致的可重复性。
1. VASP通过调节Rab11依赖性TGF-β受体的质膜靶向来促进肝星状细胞的TGF-β活化
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2. Rab5活性调节GLUT4分类为胰岛素反应性和非胰岛素反应性内体室:胰岛素抵抗发展的潜在机制。
内分l泌学。 2014年9月; 155(9):3315-28
将裂解液转移到适当大小的试管中,并置于冰上。
如果发生核裂解,则细胞裂解液可能变得非常粘稠,难以移液。 如果发生这种情况,可将裂解液通过27?号***l器针头3-4次以剪切***组DNA。
通过离心10分钟(在4°C下为12,000 x g)清除裂解物。
收集上清液并将样品保存在冰上以备立即使用,或速冻并保存在-70°C以便将来使用。
检测原理
武汉纽斯特生物技术有限公司的Cd***2活性检测***盒主要是利用识别蛋白特异形态的Cd***2-GTP单克l隆抗l体特异性的去检测细胞提取物或者体外的(样品需要进行GTPγS活化处理)活性Cd***2-GTP的水平。简言之,特异性识别Cd***2活化构象的鼠单克l隆抗l体可以特异性结合细胞裂解液中的Cd***2-GTP活性蛋白,然后利用protein A/G将抗原抗l体的结合物吸附下来,再利用特异性识别Cd***2活化构象的兔多克l隆抗l体进行免l疫印迹分析进行检测。
***制备
1X Assay/Lysis Buffer:实验前用去离子水将5X的Assay/Lysis缓冲液稀释成1X的缓冲液,并在使用前加入蛋白酶***l剂如1 mM PMSF, 10 μg/mL leupeptin(亮肽素),或 10 μg/mL aprotinin(抑肽酶)。
样品处理
贴壁细胞
1. 培养细胞密度达到大约80%-90%之间(直径10 cm培养皿,~107个细胞),并用活性剂或***l剂进行处理。
2. 吸去培养基并用冰冷的PBS洗涤两次。
3. 向细胞中加入1X Assay/Lysis缓冲液(每个直径10cm的***培养皿中加入0.5-1mL)。
4. 将培养皿放置于冰上处理10-20分钟。
5. 用细胞刮棒把细胞从培养皿下分离下来。
6. 将细胞裂解物转入合适的管中并放置于冰上。
7. 如果核发生裂解,细胞裂解物可能会变得非常的粘稠并且难以吸取。当这种情况出现时,将细胞裂解物用27?的***l器针头来回吸取3-4次,以******组DNA,从而避免上述情况的出现。
8. 4°C 12000 g, 离心10 min。
9. 收集上清(~1-2 mg总蛋白)并放置于冰上使用。如果样品不立即使用,请将处理后的样品存放于-70°C条件下。
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