如何防止PCR实验室气溶胶污染？

现实生活中，我们可以通过开窗通风、佩戴口罩等防护用品来降低气溶胶传播风险。类似地，目前PCR实验室主要通过以下措施来防范和控制实验室污染：

（1）建设***的PCR实验室，按***准备区、样本制备区、扩增及产物分析区进行严格分区，把低污染风险操作和高污染风险操作在空间上隔离开来。

（2）打造专门的负压通风系统，控制实验室空气从低风险区向高风险区单向流动，避免保存***被一次性全部污染。

（3）制定严格的实验室管理条例，控制人员物品单向流动，要求操作人员全程严格进行360度无死角全身防护。

（4）抬高实验人员门槛，需要经过上级单位规范培训、考核并获得“PCR上岗证”的人员方能上岗工作。

（5）PCR反应液分装保存，减少重复加样次数，降低***被污染风险。

（6）在PCR试验中加入内标、阴阳性对照等质控，监测检测结果，避免出现假阴性或假阳性。

（7）实验室温度控制在18~27℃，湿度控制在30%~70%。

（8）定期使用75%乙醇、含氯***和核酸去除剂及紫外线照射进行消毒等。

pcr实验室病原体测定

PCR技术的问世使病原体检测能够快速、方便地进行。由于PCR技术假阳性率太高，只要有微量病原体存在就可得到阳性结果，这并不能作为诊断依据，只有当一定数量的病原体存在时才有临床意义。因此，对模板准确定量显得特别重要，应用荧光技术PCR就能够快速、准确地得到结果。对于解决学检测的“窗口期”问题，判断***是否处于隐性或亚临床状态，以及检测不能判定是现症还是既往时，均可利用PCR进行确定。

示例：新型冠状病毒核酸检测。

方法学：荧光PCR法。

用途：用于体外定性检测新型冠状病毒的疑似病例、疑似聚集例患者、其他需要进行新型冠状病毒诊断或鉴别。

检测***：新型冠状病毒（2019-nCoV）ORFlab和N***、E***。

标本类型：上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子；下呼吸道标本：呼吸道抽取物、肺泡灌洗液样本、肺***活检标本。

检测流程：

（1）核酸检测前的生物安全防护（工作人员个人三级防护的穿戴）→（2）样本的灭活（56℃灭活30分钟）→（3）样本的核酸提取（手工、核酸提取仪）→（4）PCR体系的配制和模板加样→（5）上机检测及结果分析→（6）检测后的消毒。

其他病原体检测：HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族链球菌。

适合开展的***和：儿童***、妇幼、儿检所、第三方、各种级别的有需求的***。

PCR实验室的潜在污染来源

①临床标本中存在的大量待测微生物或待测靶核酸

②科研中得到的质粒

③以前分析研究的特定微生物或靶核酸

④大量存在于实验环境中的特定微生物或靶核酸

⑤以前扩增产物的残留污染,这也是 PCR 实验室产生的将造成假阳性的“污染”。

PCR扩增可以引起实验室中扩增产物的累积,通常一次典型的PCR

扩增可以产生109拷贝的靶序列,如果气溶胶化,甚至的气溶胶都会含有106拷贝的扩增产物。如果不加以控制,在短期内累积的气溶胶化的扩增产物即会污染实验室中的***、仪器设备和通风系统,从而造成严重的实验室“污染”,出现大量的假阳性结果。

pcr实验室设计要点

设计要点

PCR实验室可以是分散形式，也可以是组合形式。完成一组PCR实验，通常应经过***配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程，若实验工艺需要，还应增加样品粉碎过程。

一、分散形式PCR实验室

所谓分散形式PCR实验室，是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远，呈分散布置形式。对于这种布置形式的PCR实验室，由于各个实验之间不易相互干扰，因此无需特殊条件要求。

二、组合形式PCR实验室

所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置，组成***实验区域的形式。对于组合形式PCR实验室，由于各个实验间集中布置，容易造成相互干扰，因此，对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间，以减少室内外空气交换。